血管緊張素Ⅱ對人肝癌HepG2細胞生物學行為及HIF-1α表達的影響.pdf

1、目的:(1)探討血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及血管緊張素Ⅱ1型受體(angiotensinⅡtype1receptor,ATlR)拮抗劑對人肝癌HepG2細胞生物學行為及缺氧誘生因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)表達的影響。(2)研究ATlR拮抗劑對裸鼠人 HepG2原位肝癌模型腫瘤組織中HIF-1α表達的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞。

2、24 h后以不同濃度(10-8～10-6mol/L)的AngⅡ和ATlR拮抗劑坎地沙坦分別處理，每12h取出一組采用CCK-8法檢測AngⅡ對人肝癌HepG2細胞增殖的影響，直至第60h。24h后用Transwell法檢測人肝癌HepG2細胞侵襲能力，用細胞同質黏附實驗檢測人肝癌HepG2細胞黏附能力，用ELISA法檢測人肝癌HepG2細胞HIF-1α的表達水平。構建穩(wěn)定的人肝癌HepG2細胞裸鼠模型，將符合實驗要求的成功模型按照隨機法

3、分為5組，空白對照組(0.9%NaCl)、坎地沙坦低劑量組(5mg/kg/d)、坎地沙坦中劑量組(10mg/kg/d)、坎地沙坦高劑量組(20mg/kg/d)及5-FU組(25mg/kg/d)。連續(xù)喂養(yǎng)2周，第15天處死裸鼠，剝離腫瘤組織。應用RNA提取試劑盒提取腫瘤組織RNA，應用 RT-PCR法檢測各組腫瘤標本HIF-1αmRNA的表達差異。提取腫瘤組織總蛋白，應用Western Blot法檢測各組腫瘤組織HIF-1α蛋白的表達水平

4、。
　　結果:AngⅡ能提高人肝癌HepG2細胞增殖能力，且藥物作用隨著作用時間及作用濃度的增加而增強，當AngII作用濃度為10-7mo1/L，作用時間為48h時，促增殖作用達到最高峰，且該作用可以被坎地沙坦所拮抗。AngⅡ亦能促進人肝癌HepG2細胞侵襲能力、黏附能力及HIF-1α的表達，并隨著AngII濃度的提高肝癌細胞上述指標均增高，在Ang II濃度為10-7mol/L時，肝癌細胞上述指標達到最高峰，然而AngII濃度進

5、一步增高至10-6mol/L，肝癌細胞上述指標與10-7mol/L相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但與對照組相比，差異仍有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。坎地沙坦可以阻斷上述作用，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。RT-PCR和Western Blot分析顯示，隨坎地沙坦灌胃劑量的增高，裸鼠腫瘤組織中HIF-1αmRNA和蛋白表達水平進行性降低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，坎地沙坦低劑量組與5-FU組相比較，表達量