EGF、雌二醇和生長抑素對人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是我國、也是世界上最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類的健康。自20世紀(jì)90年代以來，我國肝癌的死亡率已上升到腫瘤死亡率的第二位。近年我國肝癌治療效果得到明顯提高，但由于肝癌發(fā)生機制尚未闡明，治療效果仍不滿意。肝癌發(fā)生是一個多因素、多步驟的復(fù)雜生物學(xué)過程。 HBV、HCV、表皮生長因子(EGF)、性激素、細(xì)胞因子、癌基因及抑癌基因等多種因素參與并促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生。EGF促進(jìn)肝癌細(xì)胞DNA的合成，促進(jìn)肝癌的發(fā)生與發(fā)展。EG

2、FR廣泛分布于肝細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，與細(xì)胞增殖、分化調(diào)節(jié)、腫瘤轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。EGF和EGFR在肝癌存在過表達(dá)，與肝癌的形成關(guān)系密切。雌二醇(E2)主要在肝臟代謝和滅活，可以誘導(dǎo)肝原癌基因活化。雌激素受體(ER)調(diào)控基因表達(dá)，與肝癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。生長抑素(SST)和生長抑素受體(SSTR)在體內(nèi)分布廣泛，SST及其類似物(SSTA)在體外可以抑制多種人肝癌細(xì)胞株生長，可以分別對EGF、EGFR、E2、ER產(chǎn)生抑制作用，從而發(fā)揮抗腫瘤作

3、用。在EGF、E2、SST及其受體的信號傳導(dǎo)途徑中，有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)發(fā)揮了重要作用，成為它們之間相互作用的基礎(chǔ)。EGF、E2、SST及其受體與人肝癌細(xì)胞增殖的關(guān)系及其相互作用機制尚未闡明，且缺少系統(tǒng)研究的報道。本課題試圖通過研究人重組表皮生長因子(rhEGF)、人β-雌二醇(β-E2)和人生長抑素(hSST)對人肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響和HepG2細(xì)胞EGF、EGFR、E2、ER、SST和SSTR的變化，探討上述諸

4、因素在肝癌發(fā)生中的相互作用及其機制，為應(yīng)用生長抑素治療肝癌提供實驗及理論基礎(chǔ)。 材料與方法：將人肝癌 HepG2 細(xì)胞株常規(guī)培養(yǎng)于RPMI 1640培養(yǎng)液中(內(nèi)含已用葡聚糖和活性炭去除了雌激素的10％小牛血清)，培養(yǎng)液中加入青霉素(濃度100U/m1)和鏈霉素(濃度100ug/m1)，在37℃、5％CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并進(jìn)行傳代。 結(jié)論: 1．EGF和E2均能提高人肝癌細(xì)胞增殖指數(shù)，呈濃度一時間依賴關(guān)系，其中

5、濃度對增殖指數(shù)的影響更明顯。Hsst可抑制肝癌細(xì)胞增殖，呈濃度－時間依賴關(guān)系，濃度對抑制率的影響明顯大于時間。 2．EGF、E2能分別提高人肝癌細(xì)胞EGF、EGFR、ER和E2陽性表達(dá)率，呈時間依賴，隨培養(yǎng)時間延長陽性表達(dá)率顯著提高，EGF、E2互相促進(jìn)自身及其受體的表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞增殖。 3．EGF、E2和SST能促使人肝癌細(xì)胞發(fā)生形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分裂時相等形態(tài)學(xué)改變；SST還會引起肝癌細(xì)胞凋亡。 4．Hsst能誘導(dǎo)

6、人肝癌細(xì)胞SST及其受體表達(dá)增加，并呈量效和時效關(guān)系。 5．SST能抑制人肝癌細(xì)胞EGF、EGFR、E2和ER的陽性表達(dá)率，隨濃度增加和培養(yǎng)時間延長，抑制作用更強。 6．Hsst提高人肝癌細(xì)胞SST和SSTR表達(dá)，抑制EGF、EGFR、E2、ER之間的信息傳導(dǎo)，是SST抑制人肝癌細(xì)胞增殖的主要機制。 7．EGF和E2同時升高，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的作用更顯著，為應(yīng)用EGF、E2、EGFR和ER特異抗體、反義基因封閉以