PI3K-Akt-mTOR信號傳導通路對DLBCL細胞生物學行為影響及其對BCL6表達的調控.pdf

1、復旦大學博士學位論文PI3KAktmT信號傳導通路對DLBCL細胞生物學行為影響及其對BCL6表達的調控姓名：張鐵成申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：施達仁20070406復旦大學博士研究生畢業(yè)論文中文摘要中文摘要P13呲／IT孤信號傳導通路對DLBCL細胞生物學行為影響及其對BCL6表達的調控目的觀察三株彌漫大B細胞性淋巴瘤(DiffuselargeBcelllymphomaDLBcL)細胞株中Akt及磷酸卅CAkt(pAkt，

2、phosphaAkt)表達狀態(tài)及其對DLBcL細胞生物學行為的影響；探討DLBcL細胞中Akt調控細胞周期的可能機制；觀察P13K抑制劑LY294002對DLBcL化療增敏作用；觀察Akt激活狀態(tài)與BCL6表達的關系及可能的調控機制方法分別采用P13K抑制劑LY294002、mTOR(mammaliantargetofRapamycin)抑制劑Rapamycin抑制P13K／Akt信號傳導通路，采用胰島素刺激P13K／^l【t信號傳導通

3、路；采用Westernblotting檢測DL8cL細胞株lyl、lyS、lylO在不同狀態(tài)下Akt、pAkt、pS6K1、pCSK3、cyclinDl、p27m1、p21”、peIF46、peIF4E和BCL6的表達；應用阿霉素(doxorubicin)與LY294002聯(lián)用探討LY294002在DLBCL中的化療增敏效果；采用流式細胞術結合PI單染分析細胞周期、結合AnnexinVFITC染色檢測細胞凋亡、結合Brdu法觀察細胞增殖

4、狀態(tài)的改變。結果(1)三株DLBCL細胞株在不同的培養(yǎng)條件下均顯示有pAkt，即Akt呈活化狀態(tài)，ly8和lylO在IO％FBS培養(yǎng)下pbkt水平高于無血清培養(yǎng)，而lyl相反，在無血清培養(yǎng)下pAkt略高于有血清培養(yǎng)；(2)在有血清培養(yǎng)下，LY294002可明顯降低三株細胞pAkt水平，并顯示s期細胞明顯減少(Pm鯽l，6061期細胞增加，增殖細胞比例顯著降低(Pm嘲I，以細胞株ly8、lyl0尤為明顯，但凋亡細胞無明顯增加(砂髓瑚；(3

5、)在有血清培養(yǎng)下，胰島素都可以提高Akt磷酸化水平，但并不能引起DLSCL細胞株細胞周期、細胞凋亡、細胞增殖等細胞生物學行為變化(夥口05)；(4)Rapamycin可以明顯降低S6K1磷酸化水平，但提高了Akt磷酸化水平(刑i嘲I，亦未引起DLBCL細胞株細胞周期、細胞凋亡、細胞增殖等的細胞生物學行為改變(乃n05)；(5)三株DLBcL細胞株在LY294002作用后pGSK3，p27表達顯著增高(pmOh3、cyclinDl表達顯著