17-DMAG對肝癌HepG2細胞的作用研究.pdf

1、研究背景：肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類的生命健康。我國肝癌的發(fā)病患者占全球總數(shù)的55％，每年約有11萬人死于肝癌。傳統(tǒng)的外科手術及化療或放療等方法都有其局限性，需要我們尋找治療肝癌的新方法。研究表明熱休克蛋白90(Heat shockprotein90)是細胞內重要的分子伴侶之一，參與細胞內多種蛋白的折疊、裝配及運轉，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起著重要作用，已成為治療腫瘤的新靶點。本實驗通過研究HSP90抑制劑17-DMAG對肝癌

2、細胞的作用，為肝癌的治療尋找新途徑。
　　 目的：研究HSP90新型抑制劑17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格爾德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin，17-DMAG)對肝癌細胞株HepG2增殖及凋亡的影響，并對其機制進行初步探討。
　　 方法：以不同濃度的17-DMAG及5mg/L的DDP作用于對數(shù)生長期的肝癌HepG2細胞，應用MTT比色法檢測其

3、吸光度(OD)值，計算細胞生長抑制率，計算出17-DMAG對肝癌細胞株HepG2的半數(shù)有效抑制濃度(IC50)，在光學倒置顯微鏡下觀察細胞凋亡形態(tài)學變化；Annexin V-FITC/PI雙染法檢測經17-DMAG及DDP作用后HepG2細胞的凋亡率的變化。
　　 結果：MTT法顯示17-DMAG能抑制肝癌HepG2細胞的生長增殖，100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L、1000nmol/L的17-DMAG及

4、5mg/L的DDP作用于HepG2細胞24小時細胞增殖抑制率(％)分別為：15.22±1.66、23.46±1.40、37.20±2.36，48.24±1.76，14.53±1.65；48小時細胞增殖抑制率(％)分別為：23.43±1.55、34.76±1.67、56.49±3.84、60.24±3.15、28.38±2.55；72小時細胞增殖抑制率(％)分別為30.23±2.12、44.24±1.94、62.58±4.18、71.27

5、±2.82、35.49±2.31。隨著藥物濃度增大，作用時間的延長，細胞增殖能力逐漸下降，呈時間-劑量依賴性，不同藥物組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，250nM的17-DMAG低濃度水平較DDP組對HepG2細胞的抑制率明顯增高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。光學顯微鏡觀察17-DMAG作用48h后HepG2細胞密度減低，細胞體積變小，隨著藥物濃度增大，貼壁細胞數(shù)目明顯減少。Annexin-FITC/PI雙染法檢測結果顯示，400n

6、mol/L17-DMAG干預48小時后細胞早期凋亡率(％)為22.42±1.83，5mg/L順鉑干預48小時后細胞早期凋亡率(％)為6.50±1.20，正常對照組48小時后細胞早期凋亡率(％)為0.58±0.49，表明17-DMAG能誘導HepG2細胞凋亡，且17-DMAG組凋亡率明顯高于5mg/L順鉑組及未干預組，有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：熱休克蛋白90抑制劑17-DMAG呈時間.劑量依賴性抑制肝癌He