熱休克蛋白70與P53相互作用在酵母雙雜交系統(tǒng)中的檢測(cè)及其對(duì)P53在細(xì)胞內(nèi)定位的影響.pdf

1、肝癌是中國(guó)常見的、嚴(yán)重危害人類生命的惡性腫瘤之一.HSPs在肝癌發(fā)病機(jī)制中的作用和意義仍然不清.我們近年研究發(fā)現(xiàn),在人肝細(xì)胞肝癌(HCC)組織中有多種熱休克蛋白表達(dá),其中部分HSP70與P53之間具有細(xì)胞核共定位關(guān)系,并用免疫共沉淀的方法證實(shí)了二者的相互結(jié)合.為了進(jìn)一步明確這種相互作用,并尋找二者的相互作用位點(diǎn),該研究采用GLA4酵母雙雜交系統(tǒng)檢測(cè)HSP70與P53之間的相互作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)報(bào)告基因His被激活,而Ade卻沒有被激活.隨后

2、用脂質(zhì)體介導(dǎo)熒光蛋白融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞,觀察HSP70與P53之間的相互作用及其對(duì)P53在細(xì)胞內(nèi)定位的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn),野生型和突變型P53在細(xì)胞內(nèi)的定位不同,說明P53的細(xì)胞內(nèi)定位與其功能密切相關(guān);在HSP70與P53共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中,野生型P53的細(xì)胞內(nèi)定位由細(xì)胞核改變?yōu)榧?xì)胞漿;HSP70與突變型P53(273mutant)存在細(xì)胞漿共定位關(guān)系;但與C末端缺失的突變型P53(342mutant-stop)卻沒有共定位關(guān)系.說明