蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的調(diào)控.pdf

1、卵母細(xì)胞的成熟過程受細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)磷酸化的調(diào)控，而蛋白質(zhì)磷酸化受蛋白激酶(Protein kinase，PK)和蛋白磷酸酶(Protein phosphatase，PP)的雙重調(diào)控。有關(guān)蛋白激酶活性的調(diào)控對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的影響研究已有許多報(bào)道，但是蛋白磷酸酶活性及其調(diào)控對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的研究尚未多見。本研究的目的旨在證明小鼠卵母細(xì)胞中蛋白磷酸酶的存在及其活性的調(diào)控對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響。 本試驗(yàn)以6-12周齡昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)材料，

2、進(jìn)行了以下研究： 1．各種類型卵母細(xì)胞的體外成熟及體外受精從卵巢中獲取卵母細(xì)胞，將其分成3類，即卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(Cumulus-oocyte complexs，COCs)、部分裸露卵(partly naked oocyte，PNO)、裸卵(naked oocyte，NO)，分別在體外培養(yǎng)12h并進(jìn)行體外受精。結(jié)果顯示，NO的成熟率(％)顯著(P<0.05)低于PNO(％)和COCs(％)的成熟率，而PNO和COCs之間無顯

3、著差異；同樣，NO的受精率(％)顯著(P<0.01)低于PNO(％)和COCs(％)的受精率，而PNO和COCs之間無顯著差異。這些結(jié)果表明，卵丘細(xì)胞有利于卵母細(xì)胞的成熟及受精。 2．小鼠卵母細(xì)胞中蛋白磷酸酶活性將體外培養(yǎng)的不同時(shí)期的卵母細(xì)胞，用PNPP蛋白磷酸酶試劑盒進(jìn)行蛋白磷酸酶測(cè)定。結(jié)果顯示，生發(fā)泡期(germinal vesicle，GV)蛋白磷酸酶活性為0.09，生發(fā)泡破裂期(germinal vesicle brea

4、kdown，GVBD)酶活性顯著(P<0.01)下降(0.065)，而第一次減數(shù)分裂中期(metaphase I，MI)又顯著(P<0.01)升高(0.138)，到第二次減數(shù)分裂中期(metaphase Ⅱ，MII)又顯著下降(0.07)。這些結(jié)果表明，小鼠卵母細(xì)胞中含有蛋白磷酸酶，其活性隨不同發(fā)育時(shí)期改變。 3．小鼠卵母細(xì)胞中PP1、PP2A的確定經(jīng)特異抑制劑花萼海綿誘癌素A(calyculinA，CL-A)和岡田酸(okad

5、aic acid，OA)抑制試驗(yàn)證明，卵母細(xì)胞蛋白磷酸酶中存在PP1扣PP2A。其中MI期PP2A活性(0.008)顯著高于GV和GVBD期(0.0080，0.0046)，差異極顯著(P<0.01)，與MII期相比，差異顯著(P<0.05)。PP1 GVBD期的活性(0.002)明顯低于GV期(0.0032)差異顯著(P<0.05)，其它各期差異不顯著(P>0.05)。這些結(jié)果表明，小鼠卵母細(xì)胞中含有PP1、PP2A和其它蛋白磷酸酶，且

6、PP1、PP2A參與小鼠卵母細(xì)胞成熟過程的調(diào)控。 4．PP1/PP2A對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟和受精過程的調(diào)控用50nMCL-A或1.0uM OA對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間處理，觀察對(duì)卵母細(xì)胞成熟和受精的影響。結(jié)果顯示，用CL-A和OA長時(shí)間(24h)處理GV完整的小鼠卵母細(xì)胞，可提高GVBD發(fā)生率，但不能正常發(fā)育到MII期，且大多數(shù)表現(xiàn)出細(xì)胞質(zhì)異常。經(jīng)短暫處理10min，可顯著增強(qiáng)GVBD，能發(fā)育到MII且不增加細(xì)胞質(zhì)異常發(fā)生率，并