STAT3介導(dǎo)IL-6對(duì)細(xì)胞自噬抑制作用的研究.pdf

1、目的:探討IL-6對(duì)饑餓誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬過(guò)程的影響及其分子機(jī)制。
　　方法:將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、饑餓組及饑餓+IL-6組，首先采用western blot法檢測(cè)了LC3蛋白的表達(dá)水平，細(xì)胞免疫熒光法統(tǒng)計(jì)LC3熒光點(diǎn)的量并借助電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬泡數(shù)量變化和形態(tài)特征;western blot法檢測(cè)并篩選自噬及IL-6下游主要通路蛋白表達(dá)水平;然后，采用關(guān)鍵信號(hào)分子的抑制劑并構(gòu)建其突變體等方法，進(jìn)一步檢測(cè)其在IL-6抑制自噬中的作用，同時(shí)通

2、過(guò)Beclin1 siRNA，Atg14siRNA的干擾實(shí)驗(yàn)分析IL-6影響自噬過(guò)程的分子機(jī)制。
　　結(jié)果:(1)我們發(fā)現(xiàn)，在饑餓處理的U937細(xì)胞內(nèi)，外源IL-6（30ng/ml）的添加降低了LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值，且二者的比值隨IL-6濃度的增加而減小，同時(shí)IL-6的處理下調(diào)了免疫熒光反應(yīng)中LC3的熒光點(diǎn)數(shù)，表明IL-6負(fù)向調(diào)控細(xì)胞自噬過(guò)程。(2)饑餓誘導(dǎo)下，細(xì)胞內(nèi)與自噬相關(guān)的主要信號(hào)分子Akt，ERK1/2，STAT3的

3、磷酸化水平均發(fā)生變化。IL-6(30ng/ml)添加后，Akt，ERK1/2的磷酸化水平未發(fā)生明顯變化，但STAT3的磷酸化水平明顯升高，活化了胞內(nèi)STAT3通路，并促進(jìn)了Bcl-2的表達(dá)，同時(shí)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著下調(diào)，p62未發(fā)生明顯降解。(3)STAT3抑制劑LLL12作用于細(xì)胞后，p-STAT3活性顯著降低，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ，Beclin1及VPS34蛋白水平均有明顯的上調(diào);突變體STA

4、T3Y705F的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明，IL-6的處理不影響STAT3Y705F轉(zhuǎn)染的細(xì)胞內(nèi)的自噬水平。(4)在Beclin1 siRNA，Atg14 siRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，IL-6的添加不影響?zhàn)囸I作用后胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)論:綜上所述，(1) IL-6抑制細(xì)胞自噬，STAT3介導(dǎo)IL-6抑制細(xì)胞自噬過(guò)程;(2) Beclin1，Atg14參與IL-6抑制細(xì)胞的自噬過(guò)程。深入探討IL-6與細(xì)胞自噬的關(guān)系，將有助于探究與IL