IL-24對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用研究.pdf

1、背景：卵巢癌是人類最難治愈的腫瘤之一。傳統(tǒng)的治療方法包括手術(shù)、化療、放療及綜合治療等均無法明顯提高患者的五年存活率，因此探討新的更有效的卵巢癌的治療方法十分重要和迫切。近年認(rèn)為基因治療最具有臨床應(yīng)用前景。白細(xì)胞介素-24(IL-24)是一種新發(fā)現(xiàn)的具有明顯抗腫瘤作用而對正常細(xì)胞沒有影響的細(xì)胞因子，成為腫瘤基因治療的研究熱點(diǎn)。國內(nèi)外探討IL-24用于卵巢癌基因治療的研究不多。為此在前期實(shí)驗(yàn)工作中以構(gòu)建好了真核表達(dá)載體pcDNA3.1(一)

2、-IL-24并測序鑒定的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)。 目的：探討IL-24對卵巢癌細(xì)胞系SKOV3增殖的影響。 方法：用電轉(zhuǎn)染法將重組真核表達(dá)載體pcDNA3.1(一)-IL-24穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后獲得陽性細(xì)胞克隆；用RT-PCR方法檢測鑒定目的基因mRNA表達(dá)；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞體外增殖狀況。同時(shí)以轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.1(一)的SKOV3細(xì)胞和野生型SKOV3細(xì)胞作為空載體對照和陰性

3、對照。 結(jié)果： 1．轉(zhuǎn)染48h換用G418選擇性培養(yǎng)基后，大部分轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(一)-IL-24及pcDNA3.1(一)的SKOV3細(xì)胞(分別用IL-24轉(zhuǎn)染組和空載體轉(zhuǎn)染組表示)在一周后死亡，少數(shù)細(xì)胞繼續(xù)生長增殖，在選擇培養(yǎng)基中生長2周有抗性細(xì)胞集落形成；而野生型SKOV3細(xì)胞(陰性對照組表示)則在一周后完全裂解死亡。 2．基因轉(zhuǎn)染后，IL-24轉(zhuǎn)染組、空載體轉(zhuǎn)染組及陰性對照組SKOV3細(xì)胞抽提總的RNA

4、，經(jīng)RT-PCR檢測表明，IL-24轉(zhuǎn)染組SKOV3細(xì)胞在600+bp處出現(xiàn)陽性條帶，空載體轉(zhuǎn)染組及陰性對照組SKOV3細(xì)胞未見相似的陽性條帶。凝膠圖像分析儀分析IL-24mRNA相對表達(dá)水平，結(jié)果顯示空載體轉(zhuǎn)染組和陰性對照組SKOV3細(xì)胞中IL-24mRNA相對表達(dá)水平為0；IL-24轉(zhuǎn)染組SKOV3細(xì)胞中IL-24mRNA相對表達(dá)水平為0.18±0.03。 3．IL-24轉(zhuǎn)染組、空載體轉(zhuǎn)染組及陰性對照組SKOV3細(xì)胞MTT