大黃素單獨(dú)及互聯(lián)合順鉑對卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生長抑制作用的研究.pdf

1、目的:1、研究大黃素(Emodin)作用于人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3細(xì)胞及SKOV3裸鼠移植瘤的生長抑制作用;2、研究大黃素對卵巢癌細(xì)胞和卵巢癌移植瘤的凋亡誘導(dǎo)作用;3、檢測大黃素作用前后卵巢癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，探討大黃素的作用機(jī)制;研究大黃素增強(qiáng)卵巢癌裸鼠移植瘤對化療藥物的敏感性的作用。
　　 方法:MTT法檢測不同濃度大黃素（10，20，40，80μM）對SKOV3的生長抑制作用;MTT法檢測低濃度大黃素聯(lián)合順鉑作

2、用時對SKOV3的生長抑制作用;流式細(xì)胞儀(FCM)檢測大黃素單獨(dú)或聯(lián)合順鉑作用于卵巢癌細(xì)胞SKOV3的凋亡誘導(dǎo)情況;蛋白印跡法檢測SKOV3細(xì)胞中caspase3、caspase9和Survivin蛋白的表達(dá)，并檢測大黃素單獨(dú)作用和聯(lián)合順鉑對SKOV3細(xì)胞中caspase3、caspase9和Survivin蛋白表達(dá)的影響。
　　 建立卵巢癌荷瘤裸鼠動物模型，建模成功后隨機(jī)分為對照組，大黃素低濃度組、大黃素高濃度組，大黃素高濃

3、度組，隔日腹腔用藥，連續(xù)兩周，觀察腫瘤體積變化（RTV，RTV=V/VO，VO為分組給藥前的腫瘤體積，V為用藥處理過程中所測得的腫瘤體積），處死動物后完整的剖取腫瘤塊，稱重。
　　 建立卵巢癌荷瘤裸鼠動物模型，建模成功后隨機(jī)分為對照組，大黃素組、順鉑組，大黃素聯(lián)合順鉑組，隔日腹腔用藥，連續(xù)兩周，觀察腫瘤體積變化（RTV，RTV=V/VO，VO為分組給藥前的腫瘤體積，V為用藥處理過程中所測得的腫瘤體積)，處死動物后完整的剖取腫瘤塊

4、，稱重。
　　 Western blot法測量經(jīng)不同濃度大黃素作用和大黃素聯(lián)合順鉑作用后裸鼠腫瘤組織中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:Emodin對卵巢癌SKOV3細(xì)胞和卵巢癌SKOV3細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長抑制作用研究:應(yīng)用MTT法檢測不同濃度的大黃素（10，20，40，and80μM）作用于SKOV324小時后的生長率，結(jié)果顯示:抑制率分別為:空白對照組0.79％±9.72％;大黃素10μM組8.18％±5.0％

5、;大黃素20州組13.32％±5.39％;大黃素40μM組25.54％±9.90％;大黃素80μM組39.25％±9.13％。大黃素20μM作用于SKOV3細(xì)胞24小時后，細(xì)胞凋亡率僅10.56％;大黃素40μM作用于SKOV3細(xì)胞可以引起27.03％細(xì)胞的凋亡;大黃素80州作用于SKOV3細(xì)胞凋亡細(xì)胞為45.96％。應(yīng)用westernblot法檢測隨著大黃素的濃度升高卵巢癌細(xì)胞株中凋亡相關(guān)蛋白caspase-3和caspase-9的表

6、達(dá)水平增加，抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的survivin表達(dá)降低，顯示大黃素在體內(nèi)能夠下調(diào)靶蛋白survivin的翻譯水平，同時增加凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、caspase-9的翻譯水平。大黃素對裸鼠皮下腫瘤生長的影響:治療前各組裸鼠腫瘤大小差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，治療結(jié)束后大黃素低、中、高劑量組RTV分別為5.23±0.24、3.38±0.17、2.17±0.31，與模型組(RTV為8.45±0.47)相比差異有統(tǒng)計學(xué)

7、意義(P＜0.01)。結(jié)果表明大黃素各劑量均有抑制移植瘤生長的作用。
　　 Emodin聯(lián)合順鉑對卵巢癌SKOV3細(xì)胞和卵巢癌SKOV3細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長抑制作用研究:
　　 應(yīng)用MTT法檢測大黃素單獨(dú)或聯(lián)合順鉑作用于卵巢癌細(xì)胞系SKOV3的生長抑制作用，結(jié)果顯示:大黃素20單獨(dú)作用于SKOV3時生長抑制率為14.93％±6.41％;順鉑5μM單獨(dú)作用于SKOV3細(xì)胞時的生長抑制率約為31.86％±7.70％;但與大黃

8、素20μM聯(lián)合作用時，生長抑制率為53.50％±4.70％，空白對照組的生長抑制率為0.91％±6.63％。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測大黃素單獨(dú)或聯(lián)合順鉑作用于卵巢癌細(xì)胞系SKOV3時的細(xì)胞凋亡作用，結(jié)果顯示:順鉑5μM單獨(dú)作用于SKOV3細(xì)胞的凋亡率為23.35％，大黃素20μM與順鉑5μM聯(lián)合作用時細(xì)胞的凋亡率升高到60.07％，大黃素20μM單獨(dú)作用時凋亡率為12.61％。大黃素聯(lián)合順鉑對裸鼠皮下腫瘤生長的影響:治療前各組裸鼠腫瘤大小差異

9、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，提示各組腫瘤體積具有可比性。治療結(jié)束后大黃素組、順鉑組、大黃素順鉑聯(lián)合作用組RTV分別3.32±0.09、3.54±0.17、1.86±0.25，與模型組(RTV為8.79±0.32)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)果表明大黃素聯(lián)合順鉑能夠更好抑制移植瘤生長的作用。
　　 結(jié)論：
　　 1、Emodin能夠誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3凋亡能夠明顯抑制細(xì)胞的增殖，具有濃度依賴性;Emod

10、in能夠通過提高Caspase3、Caspase9和降低survivin的表達(dá)，增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3對順鉑的藥物敏感性并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　 2、Emodin對人卵巢癌細(xì)胞SKOV3裸鼠移植瘤的生長有明顯的抑制作用，且具有濃度依賴性;通過提高Caspase3、Caspase9和降低survivin的表達(dá)，誘導(dǎo)裸鼠移植瘤中腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 3、通過研究表明Emodin增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3對化療藥物順鉑的