miR-155對卵巢癌SKOV3細(xì)胞株增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的生命健康，卵巢癌是目前為止發(fā)現(xiàn)的女性生殖系統(tǒng)腫瘤最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的健康和生命，然而由于卵巢癌發(fā)病隱匿，發(fā)現(xiàn)時多為晚期，同時由于沒有特異的檢測指標(biāo)，為治療及判斷預(yù)后造成了難題。近幾年來miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用已成為研究熱點，越來越多的研究表明miRNA與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程密切相關(guān)，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡、增殖、遷移等生物學(xué)行為，發(fā)揮著類似癌基因或抑癌基因的作用，本研究采用細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)

2、胞轉(zhuǎn)染、流式細(xì)胞學(xué)、實時熒光定量PCR、Western blot等方法檢測miR-155和caspase3在卵巢癌SKOV3細(xì)胞株中的表達情況，探討miR-155在卵巢癌細(xì)胞株SKOV3中的表達情況及其對caspase3表達水平的調(diào)節(jié)作用，為卵巢癌基因治療提供理論基礎(chǔ)，同時為卵巢癌的早期診斷和后續(xù)基因治療提供新的視角。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細(xì)胞株。
　　2.實驗分組：實驗組即應(yīng)用Hieff Tran

3、s脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染miR-155的過表達質(zhì)粒；陰性對照組即應(yīng)用Hieff Trans脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染無miR-155的質(zhì)粒；脂質(zhì)體試劑對照組即轉(zhuǎn)染Hieff Trans脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑組；空白對照組即不轉(zhuǎn)染組。
　　3.應(yīng)用MTT法檢測各組卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖情況。
　　4.應(yīng)用AnnexinAPC/7ADD雙染法檢測各組卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡情況。
　　5.采用實時熒光定量PCR法檢測各組卵巢癌SKOV3細(xì)胞中miR

4、-155的表達情況。
　　6.Western blot法檢測各組卵巢癌SKOV3細(xì)胞中caspase3蛋白表達的情況。
　　7.用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)方式表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析、兩組間均數(shù)比較用t檢驗，若方差不齊采用秩和檢驗，P<0.05為該數(shù)據(jù)由統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測各組細(xì)胞增殖情況：0、24、48小時，實驗組與陰

5、性對照組、空白對照組、脂質(zhì)體對照組相比細(xì)胞增殖速度相似，統(tǒng)計學(xué)上無顯著差異；72小時，實驗組與其它三組相比細(xì)胞增殖速度明顯減慢，統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異。
　　2.AnnexinAPC/7ADD雙染法檢各組細(xì)胞凋亡情況：細(xì)胞轉(zhuǎn)染72小時后，實驗組與陰性對照組、脂質(zhì)體對照組及空白對照組相比細(xì)胞早期凋亡率明顯升高，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異（P<0.05）；晚期凋亡率各組間無顯著差異（P＞0.05）。
　　3.實時熒光定量PCR法檢測各組細(xì)

6、胞miR-155表達情況：實驗組miR-155的表達量與其它各對照組相比明顯升高，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異（P<0.05）。
　　4.Western blot法檢測各組細(xì)胞caspase3蛋白表達情況：實驗組與陰性對照組、空白對照組及脂質(zhì)體對照組相比caspase3蛋白表達明顯升高，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.miR-155可抑制卵巢癌細(xì)胞增殖。
　　2.說明miR-155能促進卵巢癌