大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV-3-DDP凋亡機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 研究大蒜素作用于卵巢癌耐順鉑細(xì)胞株SKOV-3/DDP后P53、Bax、Bcl-2等凋亡相關(guān)基因表達(dá)變化，探索大蒜素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　 方法：
　　 將SKOV-3/DDP細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、大蒜素組、順鉑組和大蒜素+順鉑組；大蒜素組僅加入濃度為40ug/ml的大蒜素，順鉑組加入濃度為40ug/ml的順鉑，大蒜素+順鉑組加入大蒜素和順鉑各40ug/ml，各組分別培養(yǎng)24h、48h。用MT

2、T法測(cè)定各組細(xì)胞增殖抑制率，利用金氏公式計(jì)算兩藥的合用指數(shù)(q)分析兩藥聯(lián)合應(yīng)用的效果：q=E(AB)/[EA+(1-EA)×EB]，其中E(AB)為兩藥合用的抑制率，EA和EB為各藥單用時(shí)的抑制率，q=0.85～1.15表示兩藥作用相加；q>1.15表示兩藥作用協(xié)同；q<0.85表示兩藥作用拮抗[1]。RT-PCR方法觀察各組基因P53、Bax、Bcl-2mRNA的表達(dá)，Western blot法觀察各組P53、Bax、Bcl-2蛋白

3、表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、大蒜素組、順鉑組、大蒜素+順鉑組對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用，與空白對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，大蒜素組抑制率高于順鉑組(P<0.05)，大蒜素+順鉑組培養(yǎng)24h后對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞抑制率高于其各自單用時(shí)對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞的抑制率(P<0.05)，大蒜素+順鉑組培養(yǎng)48h后對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞抑制率高于順鉑組對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞的抑

4、制率(P<0.05)，但與大蒜素組對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞的抑制率間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中大蒜素組、大蒜素+順鉑組對(duì)SKOV-3/DDP細(xì)胞的抑制率呈時(shí)間依賴(lài)性。大蒜素+順鉑組作用于SKOV-3/DDP細(xì)胞24小時(shí)后，合用指數(shù)分別為1.16；48小時(shí)后合用指數(shù)分別為0.85；根據(jù)金氏公式可以推測(cè)，兩藥合用24小時(shí)后的作用效果表現(xiàn)為協(xié)同作用；兩藥合用48小時(shí)后的作用效果表現(xiàn)為相加作用。
　　 2、順鉑組促凋亡基因P53 mRNA及蛋

5、白的表達(dá)與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，大蒜素組、大蒜素+順鉑組促凋亡基因P53 mRNA及蛋白的表達(dá)高于順鉑組、空白對(duì)照組(P<0.05)，大蒜素+順鉑組促凋亡基因P53 mRNA及蛋白的表達(dá)與大蒜素組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3、大蒜素組、順鉑組、大蒜素+順鉑組促凋亡基因Bax mRNA及蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組明顯增加(P<0.05)，大蒜素組Bax mRNA及蛋白表達(dá)高于順鉑組(P<0.05)，大

6、蒜素+順鉑組對(duì)Bax mRNA及蛋白表達(dá)高于其各自單用時(shí)Bax mRNA及蛋白表達(dá)(P<0.05)。
　　 4、順鉑組抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表達(dá)與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，大蒜素組、大蒜素+順鉑組Bcl-2mRNA及蛋白表達(dá)量較順鉑組、空白對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，大蒜素+順鉑組Bax mRNA及蛋白表達(dá)低于大蒜素組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、大蒜素對(duì)SKOV

7、-3/DDP細(xì)胞生長(zhǎng)有抑制作用，呈時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系。大蒜素對(duì)SKOV-3/DDP的抑制作用強(qiáng)于順鉑。大蒜素和順鉑間有協(xié)同/相加作用。
　　 2、大蒜素作用于SKOV-3/DDP細(xì)胞后，促凋亡基因P53、Bax mRNA及蛋白的表達(dá)增高，而抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表達(dá)降低，且優(yōu)于順鉑。大蒜素與順鉑聯(lián)合作用SKOV-3/DDP后促凋亡基因P53、Bax mRNA及蛋白的表達(dá)增高，和抑凋亡基因Bcl-2mRNA及蛋白的表達(dá)降

8、低較各自單用組明顯。
　　 3、大蒜素組促凋亡基因P53mRNA和蛋白表達(dá)量增多，伴隨著促凋亡基因Bax mRNA和蛋白有顯著性增高。表明大蒜素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制可能是先誘導(dǎo)P53 mRNA和蛋白表達(dá)，通過(guò)P53基因進(jìn)一步誘導(dǎo)Bax mRNA和蛋白表達(dá)，發(fā)揮連鎖凋亡激活效應(yīng)。
　　 4、大蒜素組Bax蛋白顯著性增高，同時(shí)伴Bcl-2蛋白表達(dá)量減低，表明大蒜素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制可能是通過(guò)升高Bax蛋白，下調(diào)Bcl-2蛋白，從而