異紫堇堿在宮頸癌SiHa細(xì)胞中通過(guò)逆上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化途徑實(shí)現(xiàn)抗癌作用.pdf

1、目的：宮頸癌是全世界導(dǎo)致婦女死亡的最主要惡性腫瘤之一，近年來(lái)發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，發(fā)病年齡亦趨于年經(jīng)化。宮頸癌的治療目前仍以手術(shù)治療為主，輔以化學(xué)藥物治療和放射治療。但手術(shù)切除創(chuàng)傷較大，功能受損嚴(yán)重；放化療常常伴有嚴(yán)重的并發(fā)癥，且醫(yī)療費(fèi)用昂貴，療效不甚滿(mǎn)意。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，HPV16亞型感染是激發(fā)宮頸上皮惡性轉(zhuǎn)化的最主要因素，但目前尚無(wú)抑制HPV基因表達(dá)和功能活性的有效方法，若能解決這一難題，將是宮頸癌防治工作的一大突破。異紫堇堿(Is

2、ocorydine，ICD)是在禿瘡花中發(fā)現(xiàn)的一種異喹啉類(lèi)生物堿單體，可從植物中直接提取也可化學(xué)合成制得。已有研究發(fā)現(xiàn)異紫堇堿可以在體外抑制攜帶不同HPV亞型的人宮頸癌Hela和SiHa細(xì)胞株中E6、E7基因的表達(dá)，本文旨在研究異紫堇堿抑制HPV16E6表達(dá)的具體作用和機(jī)制，此研究的深入可能使異紫堇堿成為一種治療HPV感染和宮頸癌的新的有效中藥單體，或?yàn)橐云錇榛A(chǔ)設(shè)計(jì)一類(lèi)新藥提供理論依據(jù)。
　　方法：體外培養(yǎng)攜帶HPV16E6的S

3、iHa細(xì)胞，利用MTT實(shí)驗(yàn)初步檢測(cè)異紫堇堿對(duì)SiHa細(xì)胞活性產(chǎn)生的影響，并通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)處理后的SiHa細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的改變。采用全基因組基因芯片表達(dá)譜技術(shù)測(cè)定異紫堇堿處理后的SiHa細(xì)胞株在轉(zhuǎn)錄基因水平上表達(dá)的改變，利用RT-PCR手段驗(yàn)證芯片結(jié)果后，通過(guò)Western-blot驗(yàn)證其在蛋白質(zhì)水平發(fā)生的改變。
　　結(jié)果：異紫堇堿對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞增生具有明顯的抑制作用，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示處理72h時(shí)最高抑制率可達(dá)6

4、8.69％。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)異紫堇堿對(duì)SiHa細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)及濃度的總凋亡率均在6%以下，細(xì)胞周期結(jié)果顯示發(fā)生了 G1/S期阻滯。由全基因組芯片結(jié)果中篩選出有意義的目的基因Caspase14。CLCA2，NDRG1以及CDH1均表達(dá)上調(diào)，并且經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果可靠，Western blot結(jié)果顯示其對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)水平上表達(dá)同步升高。此外，在Western blot實(shí)驗(yàn)中我們同時(shí)驗(yàn)證了Vimentin、HPV16E6以及PAR