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文檔簡介
1、目的：探討小分子干擾RNA(siRNA)對宮頸癌細(xì)胞系SiHa細(xì)胞中VEGF-165的表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響，對RNA干擾技術(shù)在腫瘤治療領(lǐng)域中應(yīng)用的可能性進(jìn)行初步探討，為下一步利用RNA干擾技術(shù)抑制腫瘤血管形成以及局部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供研究基礎(chǔ)。 方法：體外化學(xué)合成針對VEGF-165的siRNA，用無靜默效應(yīng)熒光標(biāo)記siRNA在轉(zhuǎn)染試劑的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞，熒光顯微鏡下監(jiān)測其轉(zhuǎn)染效率，篩選出siRNA和轉(zhuǎn)染試劑的最適宜轉(zhuǎn)染用
2、量。實(shí)驗分為3組，設(shè)未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為空白對照組，VEGF-165特異性siRNA轉(zhuǎn)染的實(shí)驗組及無關(guān)序列siRNA轉(zhuǎn)染的陰性對照組。利用MTT法檢測SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖活性，熒光實(shí)時定量RT-PCR法分別檢測轉(zhuǎn)染12、24、48和72h后SiHa細(xì)胞中VEGF-165mRNA的表達(dá)情況，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF-165蛋白分泌量的變化。 結(jié)果：VEGFsiRNA和HiPerFect Transfection Reag
3、ent的最佳質(zhì)量體積比為75ng、4.5μl。VEGF-165siRNA轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞后，各時間點(diǎn)與對照組相比VEGFmRNA表達(dá)水平明顯下降(F值分別為99.94、169.27、460.90、115.86，P<0.05)：VEGF蛋白分泌量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F值分別為107.06、136.46、147.10、54.25，P<0.05)；細(xì)胞生長較對照組明顯受到抑制(F值分別為70.58、61.17、113.39、100.9
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