壁虎醇提物抗宮頸癌SiHa細(xì)胞作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究壁虎醇提物（GEE）對(duì)宮頸癌 SiHa細(xì)胞的抗腫瘤作用，并對(duì)其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：人宮頸癌 SiHa細(xì)胞，體外常規(guī)培養(yǎng)，用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 SiHa細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分為兩部分。（1）壁虎醇提物對(duì)SiHa細(xì)胞遷移及侵襲的影響：實(shí)驗(yàn)劑量（不明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖的劑量）確定后，進(jìn)行 SiHa細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和不同濃度（0.025、0.05、0.1 mg/mL GEE）壁虎醇提物實(shí)驗(yàn)組。用不

2、同濃度的壁虎醇提物分別處理人宮頸癌SiHa細(xì)胞24 h后，通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)觀察壁虎醇提物對(duì) SiHa細(xì)胞劃痕愈合能力的影響；Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，分別用來(lái)檢測(cè)壁虎醇提物處理后，SiHa細(xì)胞遷移及侵襲能力的改變；Western blot被用來(lái)檢測(cè)壁虎醇提物對(duì)SiHa細(xì)胞內(nèi)E鈣黏蛋白（E-cadherin）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和 Rac1蛋白表達(dá)的影響。（2）壁虎醇提物對(duì) SiHa細(xì)胞增

3、殖及凋亡的影響：不同濃度（0.1、0.2、0.3 mg/mL）壁虎醇提物處理 SiHa細(xì)胞后。分別通過(guò) MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)評(píng)估壁虎醇提物體外對(duì) Siha細(xì)胞增殖能力及克隆形成能力的影響；壁虎醇提物處理后，倒置顯微鏡下觀察SiHa細(xì)胞形態(tài)的變化；Hoechst33258染色法用來(lái)檢測(cè)SiHa細(xì)胞核形態(tài)學(xué)的變化；通過(guò)Western blot檢測(cè)壁虎醇提物對(duì)SiHa細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：（1）壁虎醇提物對(duì) SiHa細(xì)胞

4、遷移及侵襲的影響：壁虎醇提物處理24 h后，0.025 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL GEE實(shí)驗(yàn)組SiHa細(xì)胞的增殖抑制率分別為1.5％、5.5%、7.3%。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示壁虎醇提物處理組SiHa細(xì)胞劃痕愈合能力減弱，壁虎醇提物濃度越高，劃痕愈合面積越小。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，隨著壁虎醇提物濃度的增加，穿透的 SiHa細(xì)胞數(shù)明顯減少，即壁虎醇提物能降低 SiHa細(xì)胞遷移及侵襲的能力。

5、壁虎醇提物處理后，SiHa細(xì)胞內(nèi)E-cadherin蛋白的表達(dá)增多，而VEGF和Rac1蛋白的表達(dá)相對(duì)減少。（2）壁虎醇提物對(duì) SiHa細(xì)胞增殖及凋亡的影響：MTT結(jié)果顯示壁虎醇提物可顯著抑制 SiHa細(xì)胞的增殖，呈劑量和時(shí)間依賴性；壁虎醇提物處理SiHa細(xì)胞24 h、48 h、72 h后，IC50值分別為0.318 mg/mL、0.239 mg/mL、0.219 mg/mL；倒置顯微鏡下可觀察到SiHa細(xì)胞內(nèi)形態(tài)的變化，與對(duì)照組比較，

6、不同濃度壁虎醇提物(0.1、0.2、0.3 mg/mL)作用后的SiHa明顯皺縮，細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞膜的完整性受損，藥物濃度越高損傷越嚴(yán)重；熒光顯微鏡下觀察到SiHa細(xì)胞凋亡的典型形態(tài)學(xué)變化，SiHa細(xì)胞可見(jiàn)染色質(zhì)濃縮、細(xì)胞核分裂和體積減少等變化。Western blot結(jié)果顯示GEE可下調(diào)Bcl-2和VEGF蛋白的表達(dá)，反之，上調(diào)Bax、Cytochrome c(Cyt c)、caspase-9和caspase-3蛋白的表達(dá)。