miR-455對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制.pdf

1、MicroRNAs(miRNAs)是一類新發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA,通常在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá),廣泛存在于真核生物中,參與細(xì)胞發(fā)育、凋亡、增殖、分化、代謝等多種重要生物學(xué)過程。研究表明異常表達(dá)的miRNAs與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。miRNAs可作為癌基因或抑癌基因參與人類腫瘤形成的多條信號通路。其中,宮頸癌中存在miRNAs的差異性表達(dá),某些特定miRNAs表達(dá)水平的改變,與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究主要是探討m

2、iR-455對宮頸癌SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制。本研究共分三個(gè)部分。
　　一、miR-455在宮頸癌中的表達(dá)改變及其miR-455成熟體轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞后表達(dá)水平的變化
　　目的:研究miR-455在宮頸癌組織中的表達(dá)改變及miR-455成熟體(miR-455mimics)轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞后表達(dá)水平的變化。
　　方法:收集宮頸癌及正常宮頸組織標(biāo)本,提取總RNA,應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PC

3、R)技術(shù)檢測miR-455的表達(dá)改變。選取人宮頸癌細(xì)胞系SiHa細(xì)胞為研究對象,轉(zhuǎn)染miR-455mimics,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后各組細(xì)胞中miR-455的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:miR-455在宮頸癌組織中較正常宮頸組織表達(dá)顯著下調(diào),轉(zhuǎn)染miR-455mimics使SiHa細(xì)胞中miR-455表達(dá)增高。
　　結(jié)論:miR-455在宮頸癌中低表達(dá)。
　　二、miR-455對宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、凋亡和周

4、期的影響
　　目的:探討miR-455對宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期等生物學(xué)特性的影響。
　　方法:在宮頸癌SiHa細(xì)胞中過表達(dá)miR-455,通過CCK-8法檢測細(xì)胞的增殖能力,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和周期變化情況。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-455mimics使miR-455表達(dá)上調(diào),可促進(jìn)SiHa細(xì)胞凋亡,抑制SiHa細(xì)胞增殖活性,導(dǎo)致細(xì)胞周期G1/S期阻滯。
　　結(jié)論:過表達(dá)miR-45

5、5可以抑制SiHa細(xì)胞增殖活性,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。提示miR-455可能作為抑癌基因在宮頸癌中發(fā)揮作用。
　　三、miR-455靶基因的預(yù)測及驗(yàn)證
　　目的:探討miR-455參與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制,為宮頸癌診斷、治療和預(yù)后提供潛在的生物學(xué)標(biāo)志物。
　　方法:應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-455的靶基因,應(yīng)用熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和Western blot方法分別從結(jié)合能力和相關(guān)性方面驗(yàn)證靶基因。
　　結(jié)果:數(shù)據(jù)庫預(yù)測P