ALEX1 在宮頸癌組織中的表達及其對細胞生物學特性的影響.pdf

1、宮頸癌是一種嚴重影響女性身心健康的疾病，據世界衛(wèi)生組織報告發(fā)病率占所有癌癥的12％,僅次于乳腺癌。ALEX1(Arm proteins lost in epithelial cancers on chromosome X1)蛋白是Arm重復蛋白家族成員之一，蛋白序列中含有兩個 Armadillo repeat結構，在蛋白 N端具有一個疏水的跨膜區(qū)。ALEX1在正常組織中除肝臟、胸腺組織低表達，外周血白細胞未見表達外均有廣泛的表達；在上皮

2、組織來源的腫瘤組織中低表達或不表達。有關報道也證明 ALEX1參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，過表達 ALEX1能抑制直腸癌細胞的克隆形成。但有關 ALEX1在宮頸癌中的作用尚未見報道。本論文將探討 ALEX1在宮頸癌組織中的表達情況，并研究其對宮頸癌細胞的相關生物學行為的影響。
　　第一部分ALEX1在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義
　　目的：研究 ALEX1蛋白在宮頸癌臨床組織與癌旁組織中的表達差異，并分析其表達差異與其臨床意義。<

3、br>　　方法：收集53對臨床宮頸癌和癌旁組織，多聚甲醛固定，乙醇脫水，石蠟包埋及切片，應用免疫組化檢測臨床宮頸癌組織與癌旁組織中 ALEX1的表達差異，并分析其臨床特性對 ALEX1的表達影響。
　　結果：在53例宮頸癌組織中有44例組織標本高表達 ALEX1蛋白(83.0%)；在53例癌旁組織中有13例組織標本高表達 ALEX1蛋白(24.5%)（*P＜0.05）；此外，在癌旁組織中 ALEX1的表達主要定位在細胞核中，而在癌

4、組織中 ALEX1的表達主要定位在細胞質中。
　　結論：ALEX1基因在宮頸癌組織中表達高，而在癌旁組織中低表達；在癌旁組織中ALEX1蛋白的表達主要為核質表達，而在癌組織中 ALEX1蛋白的表達主要為胞質表達。
　　第二部分干擾 ALEX1對宮頸癌細胞 Hela增殖、周期及凋亡的影響
　　目的：設計針對 ALEX1的干擾RNA，并探討干擾 ALEX1對宮頸癌細胞株 Hela生物學特性的影響。
　　方法：設計并合

5、成三條針對 ALEX1基因的小干擾 RNA，轉染宮頸癌細胞株 Hela細胞，并篩選出最佳干擾序列。通過流式細胞儀檢測沉默 ALEX1對宮頸癌細胞 Hela的周期、凋亡變化情況，利用CCK-8檢測沉默 ALEX1對宮頸癌 Hela增殖情況的影響。
　　結果：實時熒光定量 PCR和 Western blot檢測結果顯示，三組小干擾 RNA序列中 RNAi-3對宮頸癌細胞 Hela干擾效果最佳。流式周期和凋亡檢測顯示：ALEX1沉默組中

6、 S期細胞比例（30.00±1.77%）較未處理組（16.53±0.93%）和陰性對照組（14.41±0.86%）中 S期細胞比例顯著升高（*P＜0.05）；ALEX1沉默組中細胞凋亡率（16.41±0.59%）較未處理組（2.31±0.23%）和陰性對照組（3.15±0.33%）中細胞凋亡率顯著升高（*P＜0.05）。CCK-8檢測結果顯示：ALEX1沉默組相對未處理組和陰性對照組在72、96 h細胞生長明顯受到抑制（*P＜0.05）

7、。
　　結論：沉默 ALEX1的表達能促進人宮頸癌細胞 Hela的凋亡和阻滯細胞周期的進程并抑制其細胞增殖。
　　第三部分沉默 ALEX1增強 Res對宮頸癌細胞的敏感性
　　目的：研究沉默 ALEX1后抗癌藥物 Res對宮頸癌細胞存活率及細胞凋亡率的影響，并測定不同時間 Res處理后，其IC50的變化。
　　方法：利用 CCK-8檢測沉默 ALEX1宮頸癌對抗癌藥物 Res敏感性的影響，Res濃度設定為0、50

8、、100、200、400、600、800μmol· L-1。
　　結果：ALEX1沉默組經抗癌藥物 Res處理后相對空白組和陰性對照組經 Res抗癌藥物處理后細胞生長顯著受到抑制；且在處理48、72 h后，AEX1沉默組與陰性對照組和空白對照組的 IC50有顯著降低；流式細胞儀檢測凋亡率結果顯示，siRNA轉染 Hela細胞24 h后用濃度為300μmol· L-1的 Res處理細胞48 h中，沉默組Hela細胞凋亡率(36.33