丙戊酸鈉對6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究丙戊酸鈉(VPA)對6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導(dǎo)的帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)大鼠多巴胺能神經(jīng)元及SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用。 方法：采用腦立體定位黑質(zhì)內(nèi)給藥法，建立大鼠帕金森病模型，免疫組化法檢測VPA對模型大鼠黑質(zhì)內(nèi)酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)TH和NF-kB表達(dá)的影響。光鏡觀察VPA對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y存活的影響，熒光染料Hoech

2、st33342染色觀察VPA對SH-SY5Y細(xì)胞核形態(tài)的影響，Western Blot檢測VPA對SH-SY5Y細(xì)胞抗凋亡蛋自Bcl-2表達(dá)的影響，免疫熒光法檢測NF-kB p65在SH-SY5Y細(xì)胞中的表達(dá)情況。 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示，模型組大鼠黑質(zhì)內(nèi)TH陽性細(xì)胞的數(shù)目明顯減少，VPA組與模型組相比，大鼠黑質(zhì)內(nèi)TH陽性細(xì)胞的數(shù)目增多。模型組大鼠黑質(zhì)有大量的NF-kB p65陽性細(xì)胞，并發(fā)生核轉(zhuǎn)位；而VPA組大鼠黑質(zhì)內(nèi)NF-k

3、B p65染色相對減弱，發(fā)生p65核轉(zhuǎn)位的細(xì)胞也有所減少。顯微鏡觀察結(jié)果顯示，6-OHDA處理SH-SY5Y細(xì)胞24小時(shí)即可引起細(xì)胞存活率顯著下降，而預(yù)先用VPA處理細(xì)胞，可提高細(xì)胞存活率，細(xì)胞突起變長，明顯改善6-OHDA引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。Hoechst 33342核染色分析證實(shí)，模型組部分細(xì)胞的染色質(zhì)出現(xiàn)典型凋亡樣改變，表現(xiàn)為染色質(zhì)皺縮、濃縮，而VPA組抑制細(xì)胞凋亡樣改變。Western Blot結(jié)果顯示，6-OHDA引起SH-