線粒體K-,ATP-通道對多巴胺能神經(jīng)元保護作用研究.pdf

1、帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是一種常見的中老年人進行性神經(jīng)變性性疾病，60歲以上老年人的發(fā)病率為1-2％。關于 PD的病因和發(fā)病機制，目前認為是在遺傳易感性和年齡老化的基礎上由于接觸環(huán)境因素所致。研究提示線粒體KATP離子通道的開放可能能夠減輕某些神經(jīng)疾病的神經(jīng)細胞的調(diào)亡，從而對這些神經(jīng)變性性疾病有治療作用，二氮嗪（diazoxide）作為一種線粒體KATP通道開放劑，在腦缺血時對神經(jīng)細胞的保護作用已經(jīng)明確，

2、本實驗主要通過魚藤酮建立帕金森病模型研究線粒體KATP通道開放對PC12細胞的保護作用。 目的：利用魚藤酮建立帕金森病的PC12細胞模型，并使用線粒體KATP通道的開放劑二氮嗪和二氮嗪的拮抗劑5-羥葵酸，研究線粒體KATP通道的開放對于魚藤酮誘導的細胞凋亡的保護作用并初步探討其機制。 材料與方法：PC12細胞經(jīng)過神經(jīng)生長因子誘導為多巴胺能細胞，加入魚藤酮24h，通過四甲基偶氮唑鹽（MTT 法）檢測法確定合適的魚藤酮濃度并

3、根據(jù)本實驗室以前的實驗結(jié)果，作用于細胞后，經(jīng)用流式細胞儀、熒光顯微鏡檢測細胞凋亡；選取合適的魚藤酮濃度后，加入不同濃度的線粒體KATP通道的開放劑二氮嗪和阻斷劑5-羥葵酸作用不同時間，用MTT，流式細胞儀，JC-1，熒光顯微鏡等檢測細胞凋亡，線粒體膜電位和細胞內(nèi)蛋白聚集等的變化。 結(jié)果：魚藤酮可使多巴胺能神經(jīng)元細胞出現(xiàn)凋亡，使細胞線粒體膜電位發(fā)生去極化改變從而降低線粒體膜的穩(wěn)定性，還可引起細胞內(nèi)蛋白的聚集；加入魚藤酮的同時也加入

4、線粒體KATP通道開放劑后，能夠減少PC12細胞的凋亡，并穩(wěn)定線粒體膜電位。而同時加入線粒體KATP通道開放后的阻斷劑5-HD的PC12細胞凋亡率與魚藤酮處理相比無變化。 結(jié)論：成功建立了魚藤酮誘導的PC12細胞損傷的帕金森病細胞模型，魚藤酮可引起多巴胺能神經(jīng)元的凋亡，并與魚藤酮的作用濃度呈正比，同時，魚藤酮可使細胞線粒體膜電位發(fā)生改變，提示魚藤酮使細胞線粒體受損是其毒性作用的一個機制。線粒體KATP通道開放劑二氮嗪能夠拮抗魚藤