尼古丁對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)又被稱為“震顫麻痹”,是一種中老年常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,60歲后發(fā)病率顯著提高。患者主要表現(xiàn)為動(dòng)作緩慢,手腳或身體的其它部分靜止性震顫,身體失去柔軟性,變得僵硬。其病理改變主要是中腦黑質(zhì)紋狀體(Substantia Nigra,SN)多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生病理性改變,紋狀體內(nèi)的多巴胺(Dopamine,DA)含量降低。盡管傳統(tǒng)的藥物治療如左旋多巴,可以減輕大部分臨床癥狀,但仍無(wú)法阻

2、止多巴胺能神經(jīng)元的進(jìn)行性死亡。近些年研究發(fā)現(xiàn),慢性炎癥反應(yīng)在PD的多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性變性死亡中起重要促進(jìn)作用,抗炎有可能阻止PD的發(fā)展,因此,抗炎治療已成為目前PD研究的熱點(diǎn)之一。
　　 小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)組織中存在的獨(dú)特組織巨噬細(xì)胞,也是腦內(nèi)炎癥反應(yīng)主要的反應(yīng)性細(xì)胞。近期研究表明:有效的抑制激活小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量有助于神經(jīng)退行性變的恢復(fù)。流行病學(xué)調(diào)查研究結(jié)果顯示,吸煙與PD發(fā)病之間存在著明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。與年齡和性別相匹配的

3、非吸煙者相比,吸煙者患PD的風(fēng)險(xiǎn)較小,減少約50％。煙草中主要的成分是尼古丁(Nicotine,NIC),吸煙是攝取尼古丁的主要方式之一。然而其在PD中的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制還不完全清楚,我們推測(cè)可能與抑制小膠質(zhì)細(xì)胞(Microglia,MG)的激活有關(guān)。
　　 目的
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外原代多巴胺能神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng),采用炎癥激動(dòng)劑脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)作為工具藥,研究尼古丁對(duì)多巴

4、胺能神經(jīng)元變性的影響并探求其機(jī)理。
　　 方法：
　　 1.體外中腦原代細(xì)胞混合培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組(CON組)和不同濃度的(0.01、0.1、1、10mg/L)脂多糖組(LPSⅠ組),各組分別作用8h、24h和72h。收集細(xì)胞上清液,ELISA檢測(cè)炎性因子白細(xì)胞介素6(Interleukin-6,IL-6)的含量。細(xì)胞免疫化學(xué)觀察72h離子鈣結(jié)合蛋白1(Ionizedcalcium-binding adapter

5、moleculel,Iba1)陽(yáng)性細(xì)胞和酪氨酸羥化酶(TyrosineHydroxylase,TH)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量變化。
　　 2.實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組(CON組)、尼古丁組(NIC組)、0.1 mg/L脂多糖組(LPSⅡ組)、尼古丁+脂多糖組(NIC+LPSⅡ組),各組分別作用8h、24h和72h。收集細(xì)胞上清液,ELISA檢測(cè)炎性因子IL-6的含量。細(xì)胞免疫化學(xué)觀察8h、24h和72h離子鈣結(jié)合蛋白1陽(yáng)性細(xì)胞和酪氨酸羥化酶陽(yáng)性

6、細(xì)胞的數(shù)量變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.LPSⅠ組和CON組比較:IL-6的表達(dá)增加；Iba1陽(yáng)性細(xì)胞增加,形態(tài)為阿米巴狀；TH陽(yáng)性細(xì)胞減少,大部分細(xì)胞表現(xiàn)為突起數(shù)目的減少,突起變短并有串珠樣改變(P<0.05)。且0.1 mg/L LPS組TH陽(yáng)性細(xì)胞減少約70％。
　　 2.LPSⅡ組和CON組比較:IL-6的表達(dá)增加；Iba1陽(yáng)性細(xì)胞增加,形態(tài)為阿米巴狀； TH陽(yáng)性細(xì)胞減少,大部分細(xì)胞表現(xiàn)為突起數(shù)目的減少