淫羊藿苷對6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的多巴能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷(Icariin, ICA)對6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)誘導(dǎo)的多巴胺(Dopamine, DA)能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用，并探討其可能機(jī)制。
　　方法：⑴動物實(shí)驗(yàn)：單側(cè)中腦黑質(zhì)注射6-OHDA(8μg)制備大鼠多巴胺能神經(jīng)元損傷模型，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為5組：空白組、ICA(20 mg/kg)組，6-OHDA(8μg)組，6-OHDA+ICA(10 mg/kg)低劑量組，6-OHDA

2、+ICA(20 mg/kg)高劑量組。造模提前一天灌胃給予ICA，大鼠造模后每天灌胃給予ICA連續(xù)14天。取材前一周通過轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)觀察ICA對6-OHDA損傷大鼠行為學(xué)改變的改善作用；利用免疫組織化學(xué)染色法分別檢測大鼠中腦黑質(zhì)內(nèi) DA能神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量的變化以及小膠質(zhì)細(xì)胞激活的情況。⑵細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：取懷孕14-15天的SD大鼠胚胎的中腦組織，無菌條件下建立神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)模型，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為空白組、ICA(0.1μM)組、6-OHDA(

3、40μM)組、6-OHDA+ICA(0.01μM)低劑量組、6-OHDA+ICA(0.1μM)高劑量組。細(xì)胞給予ICA作用30 min后再給予6-OHDA。7天后，利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法分別檢測共培養(yǎng)細(xì)胞中DA能神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量的變化及小膠質(zhì)細(xì)胞激活的情況。Griess試劑檢測共培養(yǎng)細(xì)胞上清液中NO含量，ELISA法檢測TNF-α、IL-1β的含量。蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測共培養(yǎng)中 DA能神經(jīng)元表面標(biāo)記物酪氨酸羥

4、化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)和小膠質(zhì)細(xì)胞表面特異性蛋白離子鈣接頭蛋白(Ionized calcium-binding adapter molecule-1, Iba1)以及核轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族(NF-κB)中IκBα和p65蛋白的磷酸化水平。
　　結(jié)果：①動物實(shí)驗(yàn)：6-OHDA組大鼠行為活動能力明顯降低，DA能神經(jīng)元數(shù)量減少，小膠質(zhì)細(xì)胞激活增多；給予ICA后，大鼠行為活動能力得到明顯改善， DA能神經(jīng)元數(shù)

5、量增加，小膠質(zhì)細(xì)胞激活明顯被抑制。②神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：6-OHDA組的DA能神經(jīng)元數(shù)量減少，胞體縮小，樹突大量消失，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞增多，細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-1β和NO的含量明顯上升，NF-κB通路中的IκBα和p65蛋白的磷酸化水平升高；給予ICA處理后，ICA能夠保護(hù)6-OHDA導(dǎo)致的DA能神經(jīng)元損傷，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，使Iba1蛋白表達(dá)水平下降，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β和NO的含量減少，抑制了