植酸對(duì)多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究植酸（Phytic acid，PA）對(duì)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶（MPTP）誘導(dǎo)的帕金森病人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞模型中細(xì)胞活力、胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度變化、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DAT含量、β-鏈蛋白（β-catenin）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）表達(dá)、突觸囊泡循環(huán)的影響。探討植酸通過(guò)Wnt/β-cate nin信號(hào)通路和突觸囊泡循環(huán)作用對(duì)MPTP誘導(dǎo)的帕金森細(xì)胞模型多巴胺能神經(jīng)元的可能的保護(hù)作用機(jī)

2、制。
　　方法：通過(guò)體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞，經(jīng)PA預(yù)處理，MPTP誘導(dǎo)細(xì)胞建立帕金森病細(xì)胞模型，通過(guò)MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性以分析PA的神經(jīng)保護(hù)作用，用鈣離子熒光探針Fura-2/AM測(cè)定PA對(duì)胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度變化的影響，用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DAT的表達(dá)，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和細(xì)胞免疫熒光分析β-catenin和GSK-3β的表達(dá)，用FM1-43探針通過(guò)突觸囊泡循環(huán)作用分析PA

3、預(yù)處理對(duì)細(xì)胞的影響。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果表明，PA預(yù)處理能夠劑量依賴性的減弱MPTP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞損傷；通過(guò)Fura-2/AM熒光探針檢測(cè)表明PA能夠減少M(fèi)PTP誘導(dǎo)的胞內(nèi)游離鈣離子水平的增加；Western blot分析顯示，PA可以使多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（DAT）表達(dá)量顯著上調(diào)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR和細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明，PA能夠激活SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-cate nin信號(hào)通路的標(biāo)志物的表達(dá)水平。此外，通過(guò)FM1-