梔子甙通過抑制脂多糖誘導的炎癥因子的分泌增加星形膠質(zhì)細胞對多巴胺能神經(jīng)元的保護作用.pdf

1、目的：旨在通過胚胎中腦前體細胞體外培養(yǎng)獲得高純度的多巴胺能神經(jīng)元純神經(jīng)元培養(yǎng)體系，為進一步研究奠定基礎。 方法：取E12鼠胚中腦腹側(cè)的中腦前體細胞，在添加堿性成纖維細胞生長因子的DMEM/F12/N2/L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽培養(yǎng)液中進行擴增，5d后停用堿性成纖維細胞生長因子，誘導細胞分化，4d后通過Neurobasal/阿糖胞苷抑制膠質(zhì)細胞生長，獲得純神經(jīng)元，使用TH鑒定多巴胺能神經(jīng)元，計數(shù)細胞比例和純度，利用β-tu

2、bulin III鑒定神經(jīng)元，并計數(shù)細胞比例和純度。 結(jié)果：在添加了堿性成纖維細胞生長因子20ug/L的DMEM/F12/N2/L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽培養(yǎng)液中，中腦前體細胞增殖良好，體外培養(yǎng)7d后細胞數(shù)量擴增到培養(yǎng)前的(16.54±1.25)倍。使用Neurobasal/阿糖胞苷后膠質(zhì)細胞受到抑制，神經(jīng)元占94％以上，其中多巴胺能神經(jīng)元的比例可達(35.5±4.13)％。 結(jié)論：E12鼠胚中腦前體細胞原代培養(yǎng)，

3、聯(lián)合使用堿性成纖維細胞生長因子/L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽和阿糖胞苷/Neurobasal是建立高純度多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)體系的可靠途徑。 第二部分 目的：研究梔子甙在脂多糖介導的星形膠質(zhì)細胞激活對多巴胺能神經(jīng)元存活影響中的作用及可能機制。 方法：分別建立高純度多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)體系、多巴胺能神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞混合培養(yǎng)體系，予以梔子甙預處理后再加入脂多糖作用24h，觀察多巴胺能神經(jīng)元的生存率、TH mRNA

4、的表達及培養(yǎng)基中TNF-α、NO、IL-6、MMP-9和GDNF含量的變化。 結(jié)果：星形膠質(zhì)細胞促進多巴胺能神經(jīng)元的存活，梔子甙不能增加高純度多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)體系中多巴胺能神經(jīng)元的存活率，卻可增加混合培養(yǎng)體系中多巴胺能神經(jīng)元存活率達57％。脂多糖作用24h后混合培養(yǎng)體系中TNF-α、NO、GDNF含量并無顯著變化，IL-6、MMP-9含量顯著上升，梔子甙可明顯下調(diào)這種反應。 結(jié)論：脂多糖通過過度激活的星形膠質(zhì)細胞而增加