枸杞多糖對(duì)細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的抗炎癥作用.pdf

1、枸杞是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材,素有“紅寶”美稱,富含植物多糖,蛋白質(zhì),維生素等營(yíng)養(yǎng)成分。多個(gè)世紀(jì)以來常被作為滋補(bǔ)調(diào)養(yǎng)的食物而被大家所喜愛,枸杞多糖是枸杞發(fā)揮各種生物活性的主要成分。有報(bào)道證實(shí)枸杞多糖在保護(hù)視力,免疫調(diào)節(jié)[2],抗腫瘤抗衰老[3]等方面有重要作用,然而其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用及其機(jī)制還不是很清楚。目前我們的研究主要集中在枸杞多糖是否可以抑制LPS(細(xì)菌脂多糖)激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的釋放。我們的數(shù)據(jù)提示LPS可以誘導(dǎo)

2、BV2小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的NFκB(nuclearfactor-kappab)的激活,同時(shí)也可以誘導(dǎo)NFκB上游因子CASPASE3的激活。LPS也可以上調(diào)另一個(gè)凋亡因子HSP60(熱休克蛋白60)的表達(dá),提高細(xì)胞上清液中TNF-α(腫瘤壞死因子)和HSP60的含量。通過枸杞多糖處理后,小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)異常表達(dá)的NFκB和CASPASE3的表達(dá)顯著下調(diào)。同時(shí)枸杞多糖也可以抑制細(xì)胞體內(nèi)HSP60的表達(dá),降低細(xì)胞中炎癥因子TNF-α和HSP60的釋放

3、。這些結(jié)果提示枸杞多糖對(duì)LPS激活的小膠質(zhì)細(xì)胞中起著積極的保護(hù)作用。枸杞多糖有望用于神經(jīng)退行性疾病的臨床治療。
　　研究目的:
　　明確枸杞多糖對(duì)于LPS誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用,并探討枸杞多糖發(fā)揮作用的分子機(jī)制,從而確定枸杞多糖在小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用。
　　研究方法:
　　首先將體外培養(yǎng)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞加不同濃度的LBPs處理,通過MTT活力檢測(cè)法檢測(cè)LBPs對(duì)于LPS誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)

4、胞的作用。同時(shí)通過Western-Blot方法檢測(cè)LPS誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)CASPASE3,NF-κB和HSP60的表達(dá)情況,通過ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))法檢測(cè)細(xì)胞培液上清中的炎癥因子TNF-α和HSP60的含量。
　　結(jié)果:
　　1、MTT檢測(cè)結(jié)果提示,與對(duì)照組相比,單獨(dú)LPS處理BV2小膠質(zhì)細(xì)胞后,細(xì)胞的活性明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);將枸杞多糖與LPS誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞共孵育24小時(shí)后,枸杞

5、多糖(200ug/ml-800ug/ml)有效的提升了LPS誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的活性,與單獨(dú)加LPS組相比,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。綜上所述,以上結(jié)果提示枸杞多糖對(duì)LPS激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用。
　　2、通過Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,LPS單獨(dú)處理BV2小膠質(zhì)細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)的CASPASE3,HSP60和NF-κB的表達(dá)水平明顯上調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);枸杞多糖組(600u

6、g/ml)有效地抑制了LPS激活后細(xì)胞內(nèi)CASPASE3,HSP60,NF-κB的表達(dá),與LPS對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);以上結(jié)果表明枸杞多糖枸有效地抑制了與炎癥因子有關(guān)的CASPASE3,HSP60和NF-κB的表達(dá),提示枸杞多糖可能通過抑制NF-κB信號(hào)通路而發(fā)揮抗炎癥反應(yīng)。
　　3、通過ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,LPS處理BV2小膠質(zhì)細(xì)胞后,細(xì)胞上清液中的炎癥因子TNF-α和HSP60明顯增多,有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)差異(P<0.05);而枸杞多糖組(600ug/ml)有效地抑制了LPS激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的釋放,與單獨(dú)加LPS刺激組相比,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。綜上所述,這些結(jié)果提示枸杞多糖有效抑制了LPS激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)炎癥因子TNF-α和HSP60的釋放。
　　結(jié)論:
　　1、枸杞多糖對(duì)于LPS激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞引起的炎癥反應(yīng)具有抑制作用。
　　2、枸杞多糖可以有效的抑制LPS刺激后細(xì)胞內(nèi)HS