槲皮素等中藥成分抗細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)流產(chǎn)作用研究.pdf

1、動(dòng)物早期胚胎死亡，又稱隱性流產(chǎn)，不僅使胎兒夭折，而且還危害母畜的健康，嚴(yán)重影響家畜的繁殖、品種的改良及養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。因此研究動(dòng)物早期胚胎死亡的機(jī)制，尋找有效的預(yù)防措施極為重要。槲皮素(quercetin，Que)是一種具有多種生物活性的黃酮類化合物，具有很高藥用價(jià)值，在植物界中分布廣泛，是保胎中藥菟絲子、桑寄生、杜仲等的主要成分，但是槲皮素是否是其安胎作用的主要成分及作用機(jī)制尚不明確。黃芩是臨床常用的保胎藥，黃芩苷(baicalin,

2、 Bai)是其主要成分之一，本課題組前期試驗(yàn)結(jié)果證明黃芩苷具有一定的抗流產(chǎn)作用，但是具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。本研究將傳統(tǒng)中藥與其現(xiàn)代藥理相結(jié)合，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)、生殖免疫學(xué)方法，尋找能夠改善動(dòng)物子宮免疫微環(huán)境的中藥成分，不但能提高家畜的受胎率，又能為廣泛開(kāi)展的胚胎移植技術(shù)提供保障，對(duì)提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，加快品種改良，具有重要的科學(xué)意義和廣闊的生產(chǎn)應(yīng)用前景。
　　1.體內(nèi)試驗(yàn):
　　孕6d小鼠尾靜脈注射1μg/mL細(xì)

3、菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）制造小鼠早期流產(chǎn)模型。灌服不同劑量槲皮素后，隨著藥物濃度的升高，胚胎吸收率呈下降趨勢(shì)，2.5 mg/mL組胚胎吸收率降至7.50％。血清和子宮組織中TNF-α含量依次下降，其中1.25 mg/mL和2.5 mg/mL兩個(gè)劑量組下降顯著(P＜0.05);IL-10的含量呈上升趨勢(shì)，1.25 mg/mL和2.5 mg/mL兩組上升顯著(P＜0.05)。TNF-α mRNA水平下降(P＜

4、0.05)，IL-10 mRNA水平上升，其中2.5 mg/mL組與模型組相比差異顯著(P＜0.05)。子宮TLR4/NF-κB蛋白表達(dá)量下降，并且TLR4mRNA和NF-κB mRNA水平亦呈下降趨勢(shì)(P＜0.05)。子宮Bcl-2蛋白表達(dá)增加(P＜0.05)，Bax蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，使Bcl-2/Bax比值升高。血清NO含量呈下降趨勢(shì)(P＜0.05)。血清SOD和GSH-PX含量升高(P＜0.05)，MDA水平降低(P＜

5、0.05)。
　　灌服不同劑量黃芩苷后，小鼠子宮重量增加，胚胎吸收率呈上升趨勢(shì)，其中1.25 mg/mL和2.5 mg/mL組升高顯著(P＜0.05)，2.5 mg/mL組胚胎吸收率降至11.8％。血清和子宮TNF-α含量呈下降趨勢(shì)，1.25 mg/mL和2.5 mg/mL兩組與模型組比較顯著降低(P＜0.05)。子宮IL-10含量升高，其中2.5 mg/mL組與模型組相比差異顯著（P＜0.05）。血清孕酮含量有所上升，但與模型組

6、比較差異不顯著（P＞0.05）。子宮組織病理變化明顯減輕，上皮細(xì)胞間隙縮小，空泡數(shù)量明顯減少，腺體數(shù)量增多，子宮內(nèi)膜上皮形態(tài)完整。
　　2.體外試驗(yàn):
　　采用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)懷孕小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞，通過(guò)MTT法確定100ng/mL LPS為體外小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞損傷模型的最佳濃度。10μmol/L槲皮素能夠顯著升高細(xì)胞活力，使大多數(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)良好。細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示，50μmol/L和100μmol/L組TNF-α含量顯著

7、降低(P＜0.05)，IL-10含量顯著升高(P＜0.05)。10μmol/L組TLR4/NF-κB蛋白表達(dá)量顯著降低。50μmol/L槲皮素組子宮內(nèi)膜細(xì)胞中Bcl-2蛋白水平升高，Bax蛋白水平降低，使Bcl-2/Bax比值升高，降低子宮內(nèi)膜細(xì)胞對(duì)刺激的敏感性，減輕細(xì)胞的過(guò)度凋亡。應(yīng)用4μg/mL黃芩苷后，小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞存活率明顯提高，細(xì)胞活性增強(qiáng)。
　　綜上，槲皮素能夠阻斷小鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，降

8、低子宮內(nèi)膜細(xì)胞的過(guò)度凋亡;減少炎性因子TNF-α分泌及NO含量，減輕其對(duì)子宮內(nèi)膜的損傷;增加血清及子宮內(nèi)膜細(xì)胞IL-10分泌量，降低TNF-α/IL-10比值;并能夠顯著升高血清SOD和GSH-PX含量，降低MDA水平，恢復(fù)活性氧和抗氧化物質(zhì)之間的平衡狀態(tài)，減少內(nèi)皮細(xì)胞損傷，保護(hù)胚胎。黃芩苷能夠顯著降低小鼠胚胎吸收率及子宮內(nèi)膜細(xì)胞的死亡率，降低小鼠血清和子宮中TNF-α含量，升高子宮IL-10含量，使Th1/Th2免疫平衡向有利于妊娠的