槲皮素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用研究.pdf

1、目的:以C57BL/6小鼠為研究對象，采用高脂飲食結(jié)合氫醌喂養(yǎng)的方法，模擬干性AMD動物造模，觀察槲皮素對Nrf2/ARE信號通道及下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶調(diào)控作用，闡明槲皮素保護氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的作用機制。
　　方法:將C57BL/6小鼠隨機分組:分別為正常對照組、模型對照組、給藥組;正常對照組，正常飲食飲水;模型組和給藥組均予高脂飲食+氧化物氫醌飲水造模，造成小鼠視網(wǎng)膜氧化損傷，模擬干性AMD動物模型;給藥組，以槲皮素灌胃治

2、療，包括低劑量組100mg/kg/d，中劑量組200mg/kg/d，高劑量組400mg/kg/d;利用透射電鏡掃描，觀察RPE下沉積物厚度和寬度、Bruch膜厚度，評價造模情況及槲皮素對氧化損傷小鼠視網(wǎng)膜的保護作用;比色法測定小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量;熒光定量PCR、western blot檢測槲皮素對小鼠視網(wǎng)膜Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的轉(zhuǎn)錄及表達。
　　結(jié)果:高脂飲食+氫醌喂養(yǎng)，

3、使小鼠視網(wǎng)膜發(fā)生氧化損傷，小鼠視網(wǎng)膜RPE發(fā)生改變，RPE層下可見大量脂性堆積物，Bruch膜明顯增厚，出現(xiàn)干性AMD的典型眼底改變，成功模擬干性AMD動物模型。同正常對照組相比，模型組SOD、GSH-Px、CAT活性顯著下降，ROS、MDA含量增高;同模型組相比，槲皮素治療組SOD、GSH-Px、CAT活性明顯升高，ROS、MDA含量下降。Western blot結(jié)果顯示:正常對照組，細胞質(zhì)內(nèi)的Nrf2蛋白表達高于細胞核內(nèi)，模型對照組

4、，即發(fā)生氧化應(yīng)激時，細胞核內(nèi)的Nrf2蛋白表達高于細胞質(zhì)，說明發(fā)生氧化應(yīng)激時，Nrf2蛋白從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移入細胞核;在細胞質(zhì)中，給藥組Nrf2的表達高于模型組;在細胞核中，低中劑量組Nrf2的表達呈現(xiàn)上升趨勢，但是無明顯差異;同正常組相比，HO-1、NQO-1、GCL等Ⅱ相代謝酶的表達明顯上調(diào)，槲皮素治療組同模型組組比表達下調(diào)。PCR結(jié)果顯示:同正常對照組相比，模型組Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的表達明顯升高，同模型組相比，給藥組