納米脂質(zhì)體槲皮素對肝損傷大鼠保肝作用的研究.pdf

1、目的：肝臟易發(fā)生各種代謝性、感染性疾病以及原發(fā)性和繼發(fā)性腫瘤。我國是肝病高發(fā)區(qū),有十分之一多的人口感染肝炎,而乙型肝炎表面抗原陽性患者比陰性者顯著增高[1]。肝炎導(dǎo)致的原發(fā)性肝癌是在我國腫瘤死因中占第二位的常見病。因此研究肝靶向性治療藥物具有重要意義。
　　使用特殊的載體是目前實現(xiàn)肝靶向藥物運(yùn)輸?shù)闹饕绞?而納米載體可以改變藥物的體內(nèi)分布,顯示出體內(nèi)分布的靶向性。載藥納米顆粒進(jìn)入人體內(nèi)迅速被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)攝取,而RES主要

2、分布于肝,因而可借此種被動靶向作用達(dá)到肝靶向給藥的目的[2]。脂質(zhì)體(liposome)是磷脂依靠疏水締合作用在水中自發(fā)形成的一種分子有序組合體,為多層囊泡結(jié)構(gòu),每層均為類脂雙分子膜,層間和脂質(zhì)體內(nèi)核為水相,雙分子膜為油相。載藥脂質(zhì)體納米粒具有與細(xì)胞結(jié)構(gòu)相似,有生物膜的特性和功能,進(jìn)入體內(nèi)被生物降解,免疫原性小、毒性極低;已廣泛用于運(yùn)載水溶性和脂溶性藥物[3]-[4]。
　　槲皮素(Quercetin)及其衍生物是自然界分布最廣的

3、一種黃酮類化合物,其具有抗癌、抗炎癥、抗纖維化、抗氧化和清除自由基、抗病毒、逆轉(zhuǎn)某些腫瘤的耐藥性、擴(kuò)張血管、降低血壓的藥理活性,并對機(jī)體免疫有增強(qiáng)作用;它可對肝癌細(xì)胞顯出較強(qiáng)的細(xì)胞毒作用,能有效抑制肝癌細(xì)胞的生長;對肝損傷具有良好的保護(hù)作用及一定的抗肝纖維化的作用[5],在治療肝臟疾病中有著廣闊的應(yīng)用前景。但由于其普通制劑不溶于水,肝靶向性差,直接應(yīng)用可影響凝血功能[6],限制了其在肝病治療中的應(yīng)用。根據(jù)上述思想,以納米脂質(zhì)體為藥物載體

4、包裹中藥成分槲皮素制成納米脂質(zhì)體槲皮素,改善給藥系統(tǒng)水溶性,實現(xiàn)肝靶向給藥,使納米藥物在肝臟中更加聚集。
　　本課題目的是首先制備出水溶性較好的納米脂質(zhì)體槲皮素,驗證其肝臟靶向性及體內(nèi)代謝的藥效成分,然后應(yīng)用于肝損傷模型動物考察其對肝臟的保護(hù)作用。
　　方法：采用高壓均質(zhì)-噴霧干燥法制備納米脂質(zhì)體槲皮素,使用透射電鏡、粒度儀觀察其形態(tài)及測量其粒徑,HPLC法測量藥物包封率。使用CCL4加豬血清配合乙醇飲食建立復(fù)合大鼠肝損傷模

5、型,同時建立測定模型大鼠血漿及各組織中槲皮素的HPLC法,肝損傷大鼠分組后分別給予槲皮素和納米脂質(zhì)體槲皮素,觀察各組模型大鼠體內(nèi)槲皮素的時間空間分布,并驗證其靶向性。給予正常大鼠納米脂質(zhì)體槲皮素,使用高效液相色譜-質(zhì)譜法(LCMS)分析大鼠血漿中的藥物代謝產(chǎn)物是否存在藥效成分,為藥效學(xué)研究提供依據(jù)。將肝損傷模型大鼠按體重隨機(jī)分為正常對照組、損傷模型對照組、納米脂質(zhì)體槲皮素組、槲皮素藥物組,空白納米脂質(zhì)體組后按不同劑量給藥,比較各組大鼠血

6、清ALT、AST、TBiLi、TBA、TP;各組大鼠肝臟系數(shù);各組大鼠肝臟的病理改變;各組大鼠肝臟MDA、GSH-Px、SOD、LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C。同時通過各組大鼠肝臟Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的比較,探討納米脂質(zhì)體槲皮素保護(hù)肝臟的機(jī)制。
　　結(jié)果：采用本實驗方法制得的納米脂質(zhì)體槲皮素粒徑為123+31nm,納米粒子呈類圓形,表面有厚度均勻的包衣包裹,且粒度分布均勻。為測定槲皮素納米藥物所建立的HPLC法色譜分離良好,精密

7、度、重現(xiàn)性、方法回收率良好。納米脂質(zhì)體槲皮素的包封率為91.18±0.78％,載藥量為0.61±0.08mg/mg。本實驗所建立的復(fù)合肝損傷模型大鼠達(dá)到實驗要求。用于測定血漿及各組織中槲皮素的HPLC法色譜分離及專屬性良好,精密度、重現(xiàn)性、方法回收率良好。槲皮素在肝損傷大鼠體內(nèi)的藥物半衰期為10min,而納米脂質(zhì)體槲皮素在大鼠體內(nèi)的藥物半衰期達(dá)到2h,脂質(zhì)體延長了槲皮素在大鼠體內(nèi)的循環(huán)時間,納米脂質(zhì)體槲皮素具有一定的緩釋性。模型大鼠體內(nèi)

8、槲皮素由注射納米藥物后5min起即可較濃集于肝,以10min后更為明顯,且明顯高于對照組(P＜0.05),槲皮素被制成納米藥物后提高了其對肝臟、脾臟的趨向性,降低了其對心臟、腎臟的趨向性;納米脂質(zhì)體槲皮素較槲皮素有很好的肝靶向性。當(dāng)納米脂質(zhì)體槲皮素藥物劑量增加到100mg/kg時,大鼠出現(xiàn)死亡。大鼠血漿中槲皮素代謝產(chǎn)物測定的色譜及質(zhì)譜條件可滿足實驗需要,使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法可確認(rèn)大鼠血漿代謝產(chǎn)物中含有槲皮素、檉柳素、異鼠李素等藥效成

9、分。納米脂質(zhì)體槲皮素組及槲皮素組大鼠的一般狀況明顯優(yōu)于損傷模型對照組和空白納米脂質(zhì)體組,但較正常對照組稍差,同劑量納米脂質(zhì)體槲皮素組在血清AST、ALT、TBiLi、TBA、TP、ALB及肝臟MDA、GSH-Px、SOD、LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C等指標(biāo)總體較損傷對照組、槲皮素組及空白脂質(zhì)體納米藥物組有明顯的提高。納米脂質(zhì)體槲皮素、槲皮素及空白脂質(zhì)體納米藥物對肝損傷大鼠肝功能保護(hù)在AST、ALT、TBiLi、TBA上呈現(xiàn)出由高到低的劑量

10、.效應(yīng)依賴關(guān)系。各組大鼠肝組織光鏡觀察可見相同劑量的槲皮素納米脂質(zhì)體藥物組的肝組織病變情況好于槲皮素組和空白脂質(zhì)體納米粒組及損傷模型組,特別是高劑量的納米脂質(zhì)體槲皮素組大鼠的肝組織病理情況接近正常對照組;同時,空白脂質(zhì)體納米粒對肝損傷大鼠的肝臟病理情況亦有所改善。損傷模型對照組、納米脂質(zhì)體槲皮素高劑量組、槲皮素藥物高劑量組,空白納米脂質(zhì)體高劑量組及正常對照組的大鼠肝臟Bcl-2蛋白的表達(dá)依次升高,而Bax蛋白表達(dá)則是依次降低。
　

11、　結(jié)論：所制備的納米脂質(zhì)體槲皮素粒度分布均勻,載藥量、包封率高。本實驗制備的納米脂質(zhì)體槲皮素與肝損傷模型大鼠肝臟有較強(qiáng)的親和力,具有良好的肝靶向性,是十分理想的靶向性給藥系統(tǒng)。本實驗制備的納米脂質(zhì)體槲皮素同時具有較好的脾靶向性,有一定的藥物緩釋性,可較長時間維持血藥濃度。納米脂質(zhì)體槲皮素在正常大鼠體內(nèi)的血漿代謝產(chǎn)物中存在藥效成分槲皮素、檉柳素及異鼠李素。納米脂質(zhì)體槲皮素對模型大鼠的肝臟保護(hù)優(yōu)于未納米化的槲皮素及空白脂質(zhì)體納米藥物,且呈正