五甲基槲皮素抗MSG小鼠和GK大鼠肝損傷的作用研究.pdf

1、五甲基槲皮素(PMQ)是天然多甲氧基黃酮家族(PMF)的成員之一,主要存在于沙棘果和山小花的根莖中,本實(shí)驗(yàn)室將黃酮醇化合物槲皮素全甲基化后得到的PMQ,具有明顯的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)優(yōu)勢(shì)。已證實(shí)PMQ的藥效學(xué)作用有:抗代謝綜合征,抗炎,抗氧化,抗心肌肥厚,抗STZ誘導(dǎo)糖尿病等。有文獻(xiàn)報(bào)道,槲皮素對(duì)于治療代謝綜合征肝臟病變能發(fā)揮明顯的作用。然而迄今為止,還未有研究報(bào)道PMQ可以改善代謝性疾病相關(guān)肝損傷。由此,本課題成功制備了谷氨酸鈉(MSG)誘

2、導(dǎo)的代謝綜合征小鼠模型,探討PMQ對(duì)MSG小鼠肝損傷可能的作用。同時(shí),在自發(fā)性非肥胖2型糖尿病GK大鼠模型上,進(jìn)一步研究PMQ抗糖代謝紊亂及對(duì)肝功能的影響和相關(guān)的作用機(jī)制。
　　第一部分五甲基槲皮素抗MSG小鼠肝損傷的作用研究
　　目的:觀察五甲基槲皮素(PMQ)對(duì)谷氨酸鈉(MSG)誘導(dǎo)的代謝綜合征小鼠的抗肝損傷的作用研究。
　　方法:2天齡新生雄性昆明種乳鼠,皮下注射MSG(3mg/g/d,10μl/g,生理鹽水溶解

3、)造模,連續(xù)7天(出生后2-8天),對(duì)照組注射等量生理鹽水,每籠哺乳數(shù)為10只。3周齡時(shí)斷乳分籠,5周齡時(shí)將造模動(dòng)物依據(jù)體重隨機(jī)分為6個(gè)組:溶劑對(duì)照組,PMQ2.5、5、10、20mg/kg,另有一組陽(yáng)性藥物對(duì)照組羅格列酮(ROS)5mg/kg,每組10只,灌胃給藥,連續(xù)13周(至18周齡)。常規(guī)飼料喂養(yǎng)至18周齡,每周監(jiān)測(cè)體重、進(jìn)食情況。宰殺前測(cè)量各組小鼠的體重、體長(zhǎng)、腰圍,取血分別檢測(cè)各組小鼠的空腹血糖、血甘油三酯(TG)、血總膽固

4、醇(TC)、血清胰島素、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),將上述各組小鼠處死后取肝臟,稱重,計(jì)算肝臟指數(shù);一部分肝組織制備切片通過(guò)HE染色觀察其病理變化情況;一部分凍存用作肝臟內(nèi)脂質(zhì)TG含量檢測(cè)。
　　結(jié)果:1)與正常對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組出現(xiàn)明顯的肥胖,表現(xiàn)為體重、腰圍、Lee指數(shù)顯著增加,體長(zhǎng)明顯縮短。溶劑對(duì)照組出現(xiàn)空腹血糖、血甘油三脂、血總膽固醇、血胰島素水平的明顯升高,顯著的胰島素抵抗。2)與

5、正常對(duì)照組相比,溶劑對(duì)照組在18周齡出現(xiàn)明顯的肝臟病變,表現(xiàn)為肝功能異常,血清ALT明顯升高(由43.13IU/L上升至52.70IU/L),AST明顯升高(由115.41IU/L上升至152.71IU/L);肝臟重量顯著增加;肝臟內(nèi)TG含量顯著升高,以及HE染色觀察到肝細(xì)胞脂肪變等病理組織學(xué)改變。3)與溶劑對(duì)照組相比,PMQ5、10、20mg/kg顯著降低MSG肥胖小鼠的體重,腰圍,LEE指數(shù),呈現(xiàn)明顯的減肥作用,PMQ2.5mg/k

6、g、ROS5mg/kg則對(duì)肥胖無(wú)改善作用。4)PMQ5、10、20mg/kg顯著改善MSG肥胖小鼠的糖脂代謝,表現(xiàn)為顯著降低空腹血糖、血TG和TC;明顯改善高胰島素血癥,胰島素抵抗。5)與溶劑對(duì)照組相比,PMQ10、20mg/kg對(duì)肝功能異常明顯改善,表現(xiàn)為血清ALT、AST明顯降低。6)PMQ各劑量組肝組織HE染色結(jié)果顯示,與溶劑對(duì)照組相比,PMQ對(duì)肝臟脂肪變無(wú)明顯改善;對(duì)肝臟內(nèi)異常脂質(zhì)TG增加也無(wú)明顯抑制作用。
　　結(jié)論:谷氨

7、酸鈉干預(yù)制備的MSG代謝綜合征合并非酒精性單純性脂肪肝小鼠的典型特征為肥胖,高血糖,高甘油三酯血癥,高膽固醇血癥,高胰島素血癥,胰島素抵抗及肝功能受損和早期單純性肝細(xì)胞脂肪變性。五甲基槲皮素可以改善MSG小鼠的糖脂代謝紊亂及肝功能異常,但是對(duì)肝臟脂肪變性無(wú)明顯療效。
　　第二部分五甲基槲皮素改善GK大鼠糖代謝和肝功能異常及機(jī)制研究
　　目的:觀察五甲基槲皮素(PMQ)對(duì)自發(fā)性非肥胖2型糖尿病GK大鼠糖代謝和肝功能的影響及相關(guān)

8、機(jī)制研究。
　　方法:Wistar大鼠為正常對(duì)照組,GK大鼠按照空腹血糖隨機(jī)分成5組:GK組(糖尿病模型組);PMQ各劑量組(PMQ2.5、5.0、10.0mg/kg);陽(yáng)性對(duì)照組:二甲雙胍組(Met300mg/kg)。將藥物加入飼料中連續(xù)喂養(yǎng)16周。每周記錄各組大鼠體重、攝食和攝水量,檢測(cè)空腹和餐后血糖、血胰島素,血清ALT、AST水平,給藥后16周時(shí),進(jìn)行OGTT實(shí)驗(yàn)。16周后宰殺取肝臟,稱重,計(jì)算肝臟指數(shù);取肝組織勻漿后試劑

9、盒檢測(cè)肝糖原含量,用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)肝臟糖異生關(guān)鍵酶G6pase和PEPCK mRNA表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)AKT、GSK3β、AMPK的磷酸化水平。
　　結(jié)果:1)與正常Wistar大鼠相比,GK大鼠呈現(xiàn)典型的多飲、多食、多尿、消瘦等三多一少癥狀?？崭寡锹云?餐后血糖顯著升高,OGTT檢測(cè)糖耐量明顯受損;空腹血胰島素顯著性升高,餐后血胰島素降低。血清ALT水平明顯升高,AST無(wú)明顯改變,提示GK大鼠肝臟功

10、能明顯受損。2)與GK組相比,PMQ給藥可明顯改善GK大鼠消瘦、多飲多食等癥狀;顯著降低餐后血糖及改善糖耐量受損,對(duì)空腹血糖無(wú)明顯影響;明顯降低空腹血胰島素水平,升高餐后血胰島素水平。3)PMQ顯著降低血清ALT水平,提示PMQ對(duì)GK大鼠肝臟有明顯的保護(hù)作用。4)與正常Wistar大鼠相比,GK大鼠的肝臟糖原含量明顯降低;給予PMQ治療后能顯著改善降低的肝臟糖原含量。5)RT-PCR結(jié)果顯示,與正常Wistar大鼠相比,GK模型組肝組織