五甲基槲皮素對(duì)糖尿病腎病大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、五甲基槲皮素（PMQ）是將黃酮醇化合物槲皮素全甲基化后得到的產(chǎn)物，具有明顯的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)室已證明PMQ的藥效學(xué)作用有：抗炎，抗氧化，抗心肌缺血再灌注損傷，抗心律失常，抗代謝綜合征等。有文獻(xiàn)報(bào)道，黃酮類化合物對(duì)于治療糖尿病最主要的并發(fā)癥之一糖尿病腎?。―N）發(fā)揮明顯的作用。本課題成功制備了大鼠2 型糖尿病腎病模型，探討PMQ 對(duì)其保護(hù)作用，并分析可能的作用機(jī)制。同時(shí)，鑒于腎小球系膜細(xì)胞（MC）在DN 發(fā)病過程中的關(guān)鍵作用，建

2、立高糖刺激MC 增殖的細(xì)胞模型，進(jìn)一步研究PMQ 抗DN的作用機(jī)制。五甲基槲皮素（PMQ）是將黃酮醇化合物槲皮素全甲基化后得到的產(chǎn)物，具有明顯的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)室已證明PMQ的藥效學(xué)作用有：抗炎，抗氧化，抗心肌缺血再灌注損傷，抗心律失常，抗代謝綜合征等。有文獻(xiàn)報(bào)道，黃酮類化合物對(duì)于治療糖尿病最主要的并發(fā)癥之一糖尿病腎病（DN）發(fā)揮明顯的作用。本課題成功制備了大鼠2 型糖尿病腎病模型，探討PMQ 對(duì)其保護(hù)作用，并分析可能的作用機(jī)

3、制。同時(shí)，鑒于腎小球系膜細(xì)胞（MC）在DN 發(fā)病過程中的關(guān)鍵作用，建立高糖刺激MC 增殖的細(xì)胞模型，進(jìn)一步研究PMQ 抗DN的作用機(jī)制。
　　 第一部分 2 型糖尿病腎病大鼠模型的建立
　　 目的：建立2 型糖尿病腎病大鼠模型。
　　 方法：2天齡新生雄性乳鼠，腹腔注射STZ（90 mg/kg）造模，對(duì)照組注射等量溶劑。4周齡時(shí)斷乳，每組6只。每日監(jiān)測(cè)體重、飲水、進(jìn)食情況。于12、16周齡分別檢測(cè)各組大鼠的空腹及

4、餐后血糖、甘油三酯（TG）及血清胰島素水平，并在16周齡時(shí)進(jìn)行口服糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）和血清肌酐（Scr）檢測(cè)。16周齡時(shí)，將各組大鼠置于代謝籠中，監(jiān)測(cè)24 h 尿量，尿比重，尿白蛋白及尿肌酐（Ucr）水平，并計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）和尿白蛋白排泄率（UAER）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將上述各組大鼠斷頭處死，分別摘取左右兩側(cè)腎臟，稱重，計(jì)算腎臟指數(shù)；制備切片通過HE 染色觀察其病理變化情況。
　　 結(jié)果：1）乳鼠腹腔注射STZ 可以

5、成功建立2 型糖尿病模型。與對(duì)照組相比，模型組在整個(gè)生長(zhǎng)過程中，表現(xiàn)出多飲、多食、體重增長(zhǎng)緩慢的特點(diǎn)。16周齡時(shí)，模型組餐后血糖和甘油三酯升高，血清胰島素水平下降，OGTT 曲線下面積增大。2）模型組在16周左右出現(xiàn)糖尿病腎病的明顯特征，與對(duì)照組相比，各腎功能指標(biāo)均表現(xiàn)出顯著性差異。模型組尿白蛋白排泄率升高（由63.50 mg/24h 上升至148.20 mg/24h），腎臟指數(shù)升高（由3.25上升至3.96），內(nèi)生肌酐清除率升高（由0

6、.98 ml/min 上升至1.49 ml/min），以及出現(xiàn)腎小球肥大、纖維化，基底膜增厚等病理改變。
　　 第二部分 PMQ 對(duì)2 型糖尿病腎病大鼠的作用及其機(jī)制研究
　　 目的：研究PMQ 對(duì)2 型糖尿病腎病大鼠的作用及機(jī)制探討。
　　 方法：造模方法同第一部分。4周齡時(shí)斷乳，6周齡時(shí)將造模動(dòng)物隨機(jī)分為4個(gè)組：模型組，PMQ 低、中、高劑量組，另有一組對(duì)照組，每組9只。分別灌胃給予PMQ 溶劑、PMQ 5、

7、10、20 mg/kg/d。檢測(cè)指標(biāo)和方法同第一部分。此外，取腎組織勻漿后檢測(cè)其SOD 及MDA水平，最后使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)腎組織PPAR-α、PPAR-β、PPAR-γ、TGF-β1、GluT1、IL-6 mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1）與模型組相比，PMQ 各劑量組對(duì)血生化指標(biāo)均有不同程度的改善，其中以降低餐后血糖、甘油三酯，升高血清胰島素水平最為顯著。2）PMQ 各劑量組對(duì)腎功能指標(biāo)均有不同程度改善。尿白蛋白排泄

8、率、腎臟指數(shù)和內(nèi)生肌酐清除率明顯降低；腎組織HE 染色結(jié)果顯示，與模型組相比，PMQ 各劑量組均可不同程度改善腎小球肥大、纖維化，基底膜增厚等病理改變。3）PMQ治療DN的機(jī)制研究顯示：PMQ 各劑量組均可升高腎組織SOD 水平，降低MDA 水平；RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型組腎組織PPAR-α、TGF-β1、GluT1、IL-6 mRNA表達(dá)上調(diào)，PPAR-γ mRNA表達(dá)下調(diào)。PMQ 可糾正上述各因子的變化。
　　

9、 第三部分 PMQ 對(duì)高糖刺激下系膜細(xì)胞的作用及其機(jī)制研究
　　 目的：研究PMQ 對(duì)高糖刺激下系膜細(xì)胞的作用及機(jī)制探討。
　　 方法：用高糖（葡萄糖濃度為30.5mM）制備系膜細(xì)胞（MC）增殖模型，同時(shí)給予PMQ（0.1,0.3,1,3或10 μM）共培養(yǎng)48 h后檢測(cè)下述指標(biāo)：通過MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力；使用天狼星紅染色法檢測(cè)膠原總量；檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)SOD、MDA的水平；使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)其PPAR-α、PP

10、AR-β、PPAR-γ、TGF-β1、GluT1、IL-6 mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1）與對(duì)照組相比，高糖刺激明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖，同時(shí)給予PMQ 時(shí)，可劑量依賴性地抑制該效應(yīng)。2）與對(duì)照組相比，高糖刺激明顯增加膠原總量。PMQ 各給藥組可顯著降低膠原總量。3）與對(duì)照相比，高糖組細(xì)胞內(nèi)SOD 水平降低，MDA 水平升高。PMQ組可改善兩參數(shù)變化。4）RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高糖組TGF-β1、GluT1、IL-6

11、 mRNA表達(dá)上調(diào)，PPAR-α、PPAR-β、PPAR-γ mRNA表達(dá)下調(diào)，PMQ 可糾正上述各因子的變化。該結(jié)果與整體動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本吻合。
　　 結(jié)論：1）乳鼠腹腔注射STZ 可以成功建立2 型糖尿病模型，在16周左右模型出現(xiàn)糖尿病腎?。―N）的明顯特征。2）在大鼠整體模型上，PMQ 對(duì)于2 型糖尿病及DN 具有改善作用。表現(xiàn)在：升高血清胰島素水平，降低餐后血糖、甘油三酯、尿白蛋白排泄率，改善內(nèi)生肌酐清除率、腎臟指數(shù)