五甲基槲皮素對(duì)豚鼠心肌收縮力和電生理特性的作用及機(jī)制研究.pdf

1、黃酮類的植物多酚一直受到醫(yī)藥界的高度關(guān)注，其中對(duì)槲皮素(QUE)的研究最深入，已證實(shí)的生物活性包括強(qiáng)心、擴(kuò)血管、降血壓、抗氧化、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制血小板聚集、抗炎、保護(hù)缺血再灌注損傷、抗腫瘤等作用。但QUE生物利用度低，半衰期短、效價(jià)低等缺點(diǎn)防礙了其開(kāi)發(fā)利用。
　　 多甲氧基黃酮是多酚類黃酮的甲基衍生物，具有明顯的藥代學(xué)特點(diǎn)和藥效學(xué)優(yōu)勢(shì)。但天然多甲氧基黃酮的提取工藝至今無(wú)重大突破，得量有限，價(jià)格昂貴，使深入研究難以進(jìn)行，我們對(duì)

2、QUE進(jìn)行了甲基化改造，獲得高純度低價(jià)位的五甲基槲皮素（PMQ），克服了藥源的瓶頸。本實(shí)驗(yàn)擬比較研究PMQ和QUE對(duì)離體豚鼠心肌收縮力和電生理特性的影響并探討其作用機(jī)制。
　　 第一部分：五甲基槲皮素對(duì)離體豚鼠心房肌生理特性的影響
　　 記錄離體心房肌收縮張力，觀察五甲基槲皮素對(duì)離體豚鼠左心房肌收縮性及右心房自律性的影響。結(jié)果表明：0.1%DMSO對(duì)各指標(biāo)均無(wú)明顯作用。10，30，100 μmol·L-1 PMQ分別使左

3、心房收縮力增加9±3%(n=9,P>0.05)，24±7%(P<0.05)，29±12%(P<0.05)。相同濃度的QUE分別使左心房收縮力增加12±2%(n=9，P<0.05)，15±3%（P<0.01)，32±9%（P<0.01)。PMQ有降低右心房自律性的趨勢(shì)，但與溶劑組（DMSO）比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10，30，100 μmol·L-1 QUE濃度依賴性地增加右心房自動(dòng)頻率8±1%(n=7,P>0.05),15±2%（P<0.05

4、)，24±2%（P<0.01)。
　　 第二部分：五甲基槲皮素對(duì)離體豚鼠心乳頭肌動(dòng)作電位和收縮力的作用
　　 同步記錄豚鼠右心室乳頭肌動(dòng)作電位和收縮力，觀察五甲基槲皮素(PMQ)對(duì)其影響。結(jié)果表明：0.1%DMSO對(duì)動(dòng)作電位各個(gè)指標(biāo)均無(wú)明顯作用。10 μmol·L-1 QUE分別使APD20，APD50，APD90延長(zhǎng)9±3%，7±1%，6±1%（n=8,P<0.01），30 μmol·L-1QUE分別使APD20，AP

5、D50，APD90延長(zhǎng)7±3%，7±1%，6±1%（n=8,P<0.01）。10，30 μmol·L-1 QUE 分別使乳頭肌收縮力增加11±3%，47±8%（n=8,P<0.01）。30，100 μmol·L-1 PMQ分別使乳頭肌收縮力增加13±3%，24±6%（n=7，P<0.01），對(duì)動(dòng)作電位各指標(biāo)均無(wú)明顯影響。
　　 第三部分：五甲基槲皮素對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞鈣、鉀電流的影響
　　 一、五甲基槲皮素對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞

6、L型鈣電流（Ica.L）的影響
　　 采用酶解法制備單個(gè)心室肌細(xì)胞，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，在電壓鉗模式下記錄心室肌細(xì)胞Ica.L。結(jié)果表明，10 μmol·L-1和30 μmol·L-1 QUE均可抑制Ica.L峰值，抑制率分別為12±3%（n=8,P<0.01）和18±5% (n=6,P<0.05)。10 μmol·L-1 PMQ對(duì)Ica.L峰值無(wú)明顯影響，濃度升至30 μmol·L-1后可見(jiàn)Ica.L被抑制，抑制率為20

7、±3%（n=7，P<0.01），洗脫后可部分恢復(fù)。10 μmol·L-1 QUE分別使激活V1/2和K值（slope factor）從-11.1±0.60 mV和5.61±0.23變化至-18.7±1.00 mV和4.90±0.37（P<0.05）。30 μmol·L-1QUE使 V1/2 從-11.9±0.78 mV變化至-21.4±0.51mV（P<0.01），K值從6.30±0.24變化至6.21±0.43（P>0.05）。PMQ

8、濃度高達(dá)30 μmol·L-1不改變Ica.L的最大激活電壓，給藥前V1/2和K值為-13.3±1.72mV，5.55±0.20，用藥后為-14.3±2.04 mV和5.40±0.56（P>0.05）。
　　 二、五甲基槲皮素對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流（IK1）的影響
　　 應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗記錄方法，在電壓鉗制下記錄藥物對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流的作用。結(jié)果表明，0.1%DMSO對(duì)IK1無(wú)明顯作用。10、30 μ

9、mol·L-1 QUE均明顯抑制IK1，抑制率分別為25±6%（n=6,P<0.01），37±4%（n=6,P<0.01），洗脫后可部分恢復(fù)。10 μmol·L-1PMQ對(duì)IK1無(wú)明顯作用，濃度升至30 μmol·L-1PMQ方見(jiàn)其抑制IK1，抑制率為18±2%（n=7,P<0.01），作用強(qiáng)度明顯低于QUE。
　　 第四部分：五甲基槲皮素對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的影響
　　 應(yīng)用酶解法制備單個(gè)心室肌細(xì)胞，F(xiàn)luo-

10、3負(fù)載細(xì)胞，采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)游離鈣的測(cè)定技術(shù)測(cè)定豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣[Ca2+]I。結(jié)果顯示，1μmol·L-1 PMQ不影響心室肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度，3 μmol·L-1與30 μmol·L-1 PMQ均可明顯增加豚鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣[Ca2+]I，增加幅度分別為72±16%，122±24%（n=7,P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 (1)PMQ與QUE均增強(qiáng)豚鼠左心房收縮力，二者作用相近。PM