CathepsinL通過調(diào)節(jié)Bim的表達影響Rotenone誘導的多巴胺能神經(jīng)元凋亡.pdf

1、目的：
　　觀察魚藤酮（Rotenone，Rot）誘導的多巴胺能神經(jīng)元凋亡中組織蛋白酶L(Cathepsin L，CTSL）和Bcl-2家族成員BH3-only蛋白Bim（Bcl-2 interacting mediator of cell death，Bim）表達的變化，并探究兩者的關(guān)系；闡明干擾Cathepsin L發(fā)揮神經(jīng)保護的作用機制。
　　方法：
　　采用Rotenone誘導PC12細胞凋亡，Western

2、blot和免疫熒光法檢測在Rotenone的刺激下PC12細胞中Cathepsin L、Bim、Egr-1的蛋白表達變化；Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)、Hoechst33258染色法檢測干擾Cathepsin L或Bim對Rotenone誘導PC12細胞凋亡的保護作用；Western blot和免疫熒光法檢測干擾或過表達Cathepsin L對凋亡相關(guān)蛋白Bim、 Egr-1、B-Myb表達的影響；采用側(cè)腦室給藥法

3、進行體內(nèi)實驗，免疫組化法檢測Cathepsin L抑制劑Z-FF-FMK對Rotenone引起的神經(jīng)元凋亡的保護作用及Cathepsin L、Bim表達的變化。
　　結(jié)果：
　　在Rotenone刺激下，PC12細胞中Cathepsin L從2h起表達明顯，Bim在3h時表達明顯。干擾Cathepsin L顯著地減少Rotenone誘導的PC12細胞凋亡和Bim表達的增強；而過表達Cathepsin L則增加了PC12細胞內(nèi)

4、Bim的表達。進一步研究發(fā)現(xiàn)，Cathepsin L能調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子B-Myb進而調(diào)節(jié)Bim，而不影響Egr-1的表達。抑制Cathepsin L減少了Rotenone誘導的大鼠多巴胺能神經(jīng)元的凋亡和Bim的表達。
　　結(jié)論：
　　干擾Cathepsin L對Rotenone誘導的多巴胺能神經(jīng)元的凋亡具有保護作用，其作用機制可能是通過影響轉(zhuǎn)錄因子B-Myb的轉(zhuǎn)錄進而抑制了凋亡蛋白Bim的表達，從而抑制神經(jīng)元凋亡；而過表達Cat