細胞焦亡在SLE炎癥反應(yīng)中作用及滋陰清熱藥影響研究.pdf

1、目的：
　　1、通過觀察狼瘡鼠、脂多糖刺激狼瘡鼠及健康鼠腎組織細胞焦亡因子和調(diào)控基因NLRP3表達差異，探討細胞焦亡信號通路及調(diào)控因子與SLE炎癥反應(yīng)的關(guān)系；
　　2、通過觀察狼瘡鼠腎組織細胞焦亡因子、調(diào)控因子NLRP3在滋陰清熱藥作用下的表達變化，探討滋陰清熱藥對 SLE炎癥相關(guān)細胞焦亡因子和調(diào)控因子NLRP3的作用，并以電鏡觀察腎小球損害情況,研究滋陰清熱藥對SLE腎組織的治療作用，為滋陰清熱藥控制SLE炎癥反應(yīng)研究提供

2、思路及方法。
　　方法：
　　1、SPF級B6.MRL-Faslpr/Jnju雌性狼瘡鼠20只，SPF級C57BL/6JN雌性健康鼠10只，周齡均為8-10周；按體重及生長狀況把模型鼠隨機分為：
　?、僦嗵墙M（L組）（n=10）：脂多糖按8mg·kg-1劑量腹腔注射，兩天一次，干預(yù)6周。
　　②模型組（M組）（n=10）：與脂多糖等容積生理鹽水腹腔注射，兩天一次，干預(yù)6周。
　?、劭瞻捉M（C組）（n=10

3、）：與脂多糖等容積生理鹽水腹腔注射，兩天一次，干預(yù)6周。用藥時觀察記錄各小鼠體重、活動、體貌等變化情況；6周后取腎組織應(yīng)用免疫組化、及熒光定量PCR檢測各組腎組織細胞焦亡因子Caspase-1、IL-1β和調(diào)控因子NLRP3表達差異。
　　2、SPF級B6.MRL-Faslpr/Jnju雌性狼瘡鼠20只，SPF級C57BL/6JN雌性健康鼠10只，周齡均為8-10周；按體重及生長狀況把模型鼠隨機分為：
　?、僦兴幗M（T組）（

4、n=10）：滋陰清熱藥按20 g·kg-1·d-1劑量灌胃(人等效劑量的2倍)，干預(yù)6周。
　　②模型組（M組）（n=10）：每天予滋陰清熱藥等容積灌胃無菌蒸餾水，干預(yù)6周。
　?、劭瞻捉M（C組）（n=10）：每天予滋陰清熱藥等容積灌胃無菌蒸餾水，干預(yù)6周。用藥時觀察記錄各組小鼠體重、活動、體貌等變化情況。6周后取腎組織電鏡觀察腎小球病理情況，免疫組化及熒光定量 PCR檢測各組腎組織細胞焦亡因子Caspase-1、IL-1β

5、和調(diào)控因子NLRP3表達差異，及足細胞靶抗原Nephrin表達變化。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組化結(jié)果顯示LPS組和模型組Caspase-1和IL-1β表達陽性位點比空白組多，染色更深；LPS組后陽性位點比模型組多，黃染更明顯；平均光密度值比較，模型組Caspase-1、lL-1β表達比空白組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；LPS組比模型組高（P＜0.05），而對比于空白組更明顯（P＜0.01）；熒光定量PCR結(jié)果顯示

6、模型組Caspase-1、lL-1β和調(diào)控因子NLRP3腎皮質(zhì)mRNA表達量比空白組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而LPS組表達比模型組高，差異有統(tǒng)計意義（P＜0.05）。
　　2、滋陰清熱藥治療后，中藥組 IL-1β免疫組化染色明顯比模型組淺，陽性位點有所減少；平均光密度值和熒光定量PCRmRNA表達結(jié)果均顯示中藥組IL-1β比模型組低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），中藥組Caspase-1染色和模型組差異不大，平均

7、光密度值和 mRNA表達和模型組數(shù)據(jù)差別無統(tǒng)計學意義（p＞0.05），但中藥組數(shù)值比模型組低，有降低趨勢；熒光定量PCR結(jié)果顯示中藥組NLRP3mRNA表達量數(shù)值比模型組低，但差異無統(tǒng)計意義（p＞0.05）；免疫組化結(jié)果顯示中藥組Nephrin表達區(qū)域分布較模型組增強，但仍比空白組少，平均光密度值中藥組比模型組高（P＜0.05）。電鏡顯示中藥組可改善腎皮質(zhì)區(qū)內(nèi)腎小球和腎小管變性，足細胞密度結(jié)果顯示中藥組比模型組升高（P＜0.05），但中

8、藥組和模型組與空白組對比均減少（P＜0.05）。與空白相比，模型組和中藥組足突寬度明顯增加（P＜0.01），而中藥組較模型組縮?。≒＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、細胞焦亡因子及調(diào)控因子NLRP3可能是SLE炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的重要途徑。
　　2、滋陰清熱藥可降低細胞焦亡因子及調(diào)控因子NLRP3表達，同時能減輕腎臟足細胞損傷及足細胞裂孔膜相關(guān)分子Nephrin蛋白表達降低，這可能是滋陰清熱藥控制SLE炎癥反應(yīng)的重要途徑。