滋陰清熱方對SLE陰虛內(nèi)熱證患者PBMC基因及蛋白表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的：SLE是對人們健康有著嚴(yán)重威脅，中醫(yī)治療又很具特色并具有明顯療效的疾病，我們選擇臨床治療SLE有效的滋陰清熱膠囊，開展滋陰清熱膠囊對SLE基因和蛋白組學(xué)的研究，探索滋陰清熱膠囊作用的基因表達(dá)和功能蛋白的微觀物質(zhì)基礎(chǔ)，加深對中醫(yī)藥治療SLE病機(jī)病理的理解，尋找有效的治療SLE中西醫(yī)結(jié)合方法。 方法： 1.制備滋陰清熱含藥血清和建立外周血單一核細(xì)胞孵化實(shí)驗(yàn)體系：(1)以滋陰清熱膠囊成人劑量換算成按高劑量和等效劑量配制滋

2、陰清熱方灌胃液對大白鼠進(jìn)行灌胃7天，于最后一次灌藥后1小時(shí)心臟取血，濾膜過濾備用；(2)觀察含藥血清對SLE患者PBMC的抗ds-DNA抗體影響，確定最佳滋陰清熱含藥血清作用濃度，并將含藥血清對SLE患者PBMC的抗ds-DNA抗體的影響作為滋陰清熱含藥血清是否有效的參照。 2．觀察滋陰清熱含藥血清對陰虛內(nèi)熱型SLE患者PBMC的基因表達(dá)譜影響：抽取陰虛內(nèi)熱型SLE患者靜脈血分離PBMC然后(1)提取滋陰清熱含藥血清孵化后的SL

3、E患者PBMC中的mRNA，(2)將mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA并擴(kuò)增，將cDNA加入基因芯片中進(jìn)行檢測，得出數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 3．觀察滋陰清熱含藥血清對SLE患者PBMC的蛋白表達(dá)譜影響：抽取陰虛內(nèi)熱型SLE患者靜脈血分離PBMC然后(1)提取滋陰清熱含藥血清孵化后的SLE患者PBMC中的蛋白，(2)將蛋白加入蛋白芯片中進(jìn)行SELDI TOF MS檢測，得出數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 4．設(shè)立地塞米松、不含藥血清和空白對照組同時(shí)進(jìn)行和滋

4、陰清熱含藥血清一樣的實(shí)驗(yàn)步驟。 結(jié)果： 1．滋陰清熱含藥血清和地塞米松能夠有效降低SLE患者PBMC的抗ds-DNA抗體濃度； 2．含藥血清、地塞米松和不含藥血清對PBMC基因表達(dá)譜的影響 (1)滋陰清熱膠囊含藥血清對SLE病人PBMC基因表達(dá)譜具有明確調(diào)控作用，滋陰清熱膠囊含藥血清上調(diào)了51基因，下調(diào)了92個(gè)基因，地塞米松對SLE病人PBMC基因表達(dá)譜調(diào)控中上調(diào)85個(gè)基因，下調(diào)126個(gè)基因。不含藥血清上

5、調(diào)147個(gè)基因，下調(diào)100個(gè)基因。 (2)含藥血清、地塞米松和不含藥血清對SLE患者PBMC基因表達(dá)譜影響的兩兩比較：含藥血清和地塞米松共同上調(diào)的基因有2個(gè)，共同下調(diào)的基因有12個(gè)，共同無上調(diào)和下調(diào)的基因有112個(gè)，僅含藥血清下調(diào)、地塞米松無上調(diào)下調(diào)12個(gè)基因，含藥血清上調(diào)、地塞米松同時(shí)無上調(diào)下調(diào)9個(gè)基因，含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)、地塞米松下調(diào)12個(gè)基因，含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)、地塞米松上調(diào)14個(gè)基因，沒有發(fā)現(xiàn)含藥血清和地塞米松調(diào)

6、控方向完全相反的基因。含藥血清和不含藥血清同時(shí)上調(diào)8個(gè)基因，含藥血清和不含藥血清同時(shí)下調(diào)16個(gè)基因，含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)、不含藥血清上調(diào)33個(gè)基因，含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)、不含藥血清下調(diào)7個(gè)基因，含藥血清上調(diào)、不含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)8個(gè)基因，含藥血清下調(diào)、不含藥血清同時(shí)下調(diào)無下調(diào)3個(gè)基因。 地塞米松和不含藥血清同時(shí)上調(diào)共6個(gè)基因，地塞米松和不含藥血清同時(shí)下調(diào)15個(gè)基因，地塞米松上調(diào)、不含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)共27個(gè)基因，地塞

7、米松下調(diào)、不含藥血清同時(shí)無上調(diào)下調(diào)共8個(gè)基因，地塞米松同時(shí)無上調(diào)下調(diào)、不含藥血清上調(diào)3個(gè)基因，地塞米松同時(shí)無上調(diào)下調(diào)、不含藥血清下調(diào)共7個(gè)基因。 (3)基因表達(dá)譜中篩選出一些基因：含藥血清、地塞米松和不含藥血清均下調(diào)基因有6個(gè)，它們是IRF1、FGFR4、POLA2、LOC51042、TGM1 和CEPT1；地塞米松和不含藥血清下調(diào)，含藥血清無上調(diào)和下調(diào)的基因是PIAGL2：地塞米松和不含藥血清上調(diào)，含藥血清無上調(diào)和下調(diào)的基因是

8、SMARCA2；含藥血清地塞米松上調(diào)，不含藥血清無上調(diào)和下調(diào)的基因是SC65和BPNT1；不含藥血清上調(diào)，含藥血清和地塞米松無上調(diào)和下調(diào)的基因是ZNF75；地塞米松下調(diào)，不含藥血清和含藥血清無上調(diào)和下調(diào)的基因是LOC51765；地塞米松上調(diào)，不含藥血清和含藥血清無上調(diào)和下調(diào)的基因是SAS，CD163、NPTXR、HOXB3、RPLPO、IL1R1及沒有命名的一個(gè)基因；含藥血清上調(diào)，不含藥血清和地塞米松無上調(diào)和下調(diào)的基因是FGFR1；含藥

9、血清下調(diào)，不含藥血清和地塞米松無上調(diào)和下調(diào)的基因是DDX6。 3．含藥血清、地塞米松和不含藥血清PBMC蛋白表達(dá)譜的影響中 (1)滋陰清熱含藥血清對陰虛內(nèi)熱型SLE的蛋白質(zhì)組學(xué)的影響：和空白對照比較共有分子量為7027、4216、4236 Da的蛋白有表達(dá)差異，經(jīng)過軟件分析，分子量為7027、8590、7675Da的蛋白可作為模式判別滋陰清熱含藥血清和空白對照的差別。 (2)地塞米松對陰虛內(nèi)熱型SLE的蛋白質(zhì)組學(xué)

10、的影響：和空白對照比較共有分子量為312Da的蛋白有表達(dá)差異，經(jīng)過專業(yè)軟件分析，分子量為3864、2929、3651、3676Da的蛋白可作為模式判別地塞米松和空白對照作用的差別。 (3)不含藥血清對陰虛內(nèi)熱型SLE的蛋白質(zhì)組學(xué)的影響：和空白對照比較共有分子量為7027、2798、4236、5270、4469、2908、4436、3104、1280、2311、4085Da的蛋白有表達(dá)差異，經(jīng)過專業(yè)軟件分析，分子量為7027和52

11、70Da的蛋白可作為模式判別不含藥血清和空白對照作用的差別。 (4)滋陰清熱含藥血清和不含藥血清對陰虛內(nèi)熱型SLE的蛋白質(zhì)組學(xué)比較：滋陰清熱含藥血清和不含藥血清比較分子量為2800Da的蛋白有表達(dá)差異，經(jīng)過專業(yè)軟件分析，分子量為2800，3551和5877Da的蛋白可作為模式判別滋陰清熱含藥血清和不含藥血清作用的差別。 結(jié)論： 1．滋陰清熱膠囊具有獨(dú)自的對陰虛內(nèi)熱型SLE藥理作用，基因表達(dá)譜結(jié)果更是說明這種作用和