滋陰固本方對(duì)急性EAE大鼠的防治作用及對(duì)脊髓內(nèi)Nogo-A蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、　　目的：多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)常見(jiàn)的自身免疫性疾病,因?qū)嶒?yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠(EAE)模型的發(fā)病情況及病理生理變化與MS 的表現(xiàn)一致,臨床公認(rèn)使用 EAE 模型作為 MS 的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?本實(shí)驗(yàn)通過(guò)EAE模型的制作,觀察滋陰固本方對(duì)急性EAE大鼠脊髓損傷后Nogo-A蛋白表達(dá)的影響,結(jié)合神經(jīng)功能損害評(píng)分,及脊髓損傷后HE染色的病理變化,進(jìn)一步探討滋陰固本方對(duì)急性 EAE 大鼠脊髓損傷的保護(hù)機(jī)制,為滋陰固本方的

2、臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　方法：雌性wistar大鼠72只,數(shù)字表隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、激素組、中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組,每組12只。采用新鮮豚鼠脊髓勻漿再加完全弗氏佐劑作為免疫抗原,接種到雌性 waster大鼠四肢真皮足墊下,并注射百日咳原液增加血腦脊液屏障通透性,建立 EAE模型。模型制備成功后觀察各組大鼠體重、飲食量和神經(jīng)行為學(xué)變化并進(jìn)行相應(yīng)的評(píng)分；行蘇木精-伊紅染色觀察脊髓組織的病理變化；用免疫組化

3、(sp)法檢測(cè)脊髓組織中Nogo-A蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.體重及神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 空白組大鼠無(wú)異常神經(jīng)行為學(xué)改變。EAE模型組大鼠注射免疫抗原后7天左右漸出現(xiàn)飲食量減少、飲水量增加、伴有體重下降、大小便失禁、四肢癱瘓等顯著的神經(jīng)行為學(xué)改變；與模型組相比,激素組及中藥高、中、低劑量組在第9天左右逐漸出現(xiàn)神經(jīng)行為學(xué)的改變,1 4天左右癥狀最為明顯,模型組與各治療組體重變化相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( p<0.05)。

4、治療組各組神經(jīng)行為評(píng)分低于模型組,激素組與中藥高、中劑量無(wú)明顯差異(p>0.05),中劑量與高劑量相比無(wú)明顯差異(p>0.05),模型組與激素組及中藥高、中、低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2. 病理變化結(jié)果 空白組大鼠脊髓組織未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、髓鞘脫失等改變；模型組大鼠脊髓組織可見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),呈袖套樣改變,伴有神經(jīng)細(xì)胞的空泡變性,及神經(jīng)元的皺縮,血管周?chē)兴枨实拿撌?伴有軸索的腫脹、變性及膠質(zhì)細(xì)胞增生

5、,與模型組相比,治療組各組的病理變化都有所改善,炎性細(xì)胞數(shù)明顯減少,無(wú)明顯的細(xì)胞變性,髓鞘脫失的病灶明顯減少,脊髓組織細(xì)胞排列相對(duì)整齊。
　　3. Nogo-A 免疫組織化學(xué)結(jié)果 Nogo-A 蛋白是軸突再生抑制因子,其陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色的物質(zhì),位于神經(jīng)元細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞的胞漿內(nèi),在機(jī)體的神經(jīng)系統(tǒng)自我修復(fù)時(shí)伴隨少突膠質(zhì)細(xì)胞的增生而大量釋放。模型組可見(jiàn) Nogo-A蛋白的表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性,與之相比,激素組與中藥高、中、低劑量 Nogo

6、-A 蛋白的表達(dá)相對(duì)減少。治療組各組間激素組與中藥高劑量之間無(wú)明顯差異( p>0.05),中藥高劑量與中劑量之間有明顯差異(p<0.05),中藥中劑量與低劑量之間有明顯差異(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功建立了多發(fā)性硬化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?
　　2.滋陰固本方預(yù)防性的治療急性期EAE大鼠,明顯減少了發(fā)病率,延緩了其發(fā)病時(shí)間；
　　3.滋陰固本方減輕了EAE大鼠脊髓組織的炎性變化,有效的控制了