大鼠顱腦創(chuàng)傷后Nogo-A蛋白和NgR表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nerve system，CNS)遭受創(chuàng)傷后，神經(jīng)系統(tǒng)功能往往不能恢復(fù)，給患者留下嚴(yán)重的后遺癥。Nogo-A是一種具有軸突再生抑制作用的蛋白質(zhì)分子，NgR作為Nogo-A的受體廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。國(guó)內(nèi)外大量的研究發(fā)現(xiàn)，在脊髓創(chuàng)傷后Nogo-A及NgR蛋白的表達(dá)顯著升高，而通過各種途徑拮抗、抑制Nogo-A和/或NgR的作用后，受損的神經(jīng)纖維再生明顯，脊髓創(chuàng)傷的恢復(fù)顯著改善。目前，對(duì)于N

2、ogo-A、NgR在顱腦創(chuàng)傷中的研究還比較少，而對(duì)Nogo-A和NgR在創(chuàng)傷腦組織中的聯(lián)合表達(dá)尚未見報(bào)道。本研究通過建立大鼠顱腦創(chuàng)傷模型，應(yīng)用免疫組化技術(shù)，觀察Nogo-A和NgR蛋白在不同程度創(chuàng)傷腦組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)，探索Nogo-A和NgR蛋白影響創(chuàng)傷后中樞神經(jīng)系統(tǒng)恢復(fù)的機(jī)制和規(guī)律，以期為開辟顱腦創(chuàng)傷治療新途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　將SPF級(jí)SD大鼠128只隨機(jī)分成4組，假手術(shù)組(n=8)、輕型顱腦創(chuàng)傷組(n=4

3、0)、中型顱腦創(chuàng)傷組(n=40)、重型顱腦創(chuàng)傷組(n=40)。采用自制改良的Feeney's自由落體裝置制造顱腦創(chuàng)傷模型，鉆開顱骨，保持硬腦膜完整，用20g砝碼從10cm高處沿導(dǎo)管墜落致輕度顱腦損傷，用20g砝碼從30cm高處沿導(dǎo)管墜落致中度顱腦損傷，用40g砝碼從25cm高處沿導(dǎo)管墜落致重度顱腦損傷，假手術(shù)組只鉆開顱骨，保持硬腦膜完整，不打擊。各創(chuàng)傷組分別于傷后12h、24h、3天、7天、14天取腦，假手術(shù)組于實(shí)驗(yàn)開始后24小時(shí)取腦，

4、應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)創(chuàng)傷灶邊緣腦組織及假手術(shù)組同一部位腦組織中Nogo-A和NgR蛋白的表達(dá)，每張切片取6個(gè)視野在高倍鏡(10(×)40)下采用免疫組化圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0計(jì)算平均光密度分析值，數(shù)據(jù)使用軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1.顱腦創(chuàng)傷后12小時(shí)創(chuàng)傷灶邊緣腦組織中Nogo-A表達(dá)顯著升高，24小時(shí)達(dá)到高峰，傷后3天Nogo-A表達(dá)有所下降，但仍高于假手術(shù)組(P＜0.05)，到傷

5、后7天Nogo-A表達(dá)又上升達(dá)到高峰，直至傷后14天Nogo-A表達(dá)仍維持在較高的水平。
　　2.創(chuàng)傷組Nogo-A表達(dá)均顯著高于假手術(shù)組(P＜0.05)，重度顱腦創(chuàng)傷組Nogo-A表達(dá)均高于輕度及中度創(chuàng)傷組(P＜0.05)，中度創(chuàng)傷組顯著高于輕度創(chuàng)傷組(P＜0.05)。
　　3.顱腦創(chuàng)傷后12小時(shí)、24小時(shí)創(chuàng)傷灶邊緣腦組織中NgR呈基礎(chǔ)表達(dá)，與假手術(shù)組比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。創(chuàng)傷后3天NgR表達(dá)較假手術(shù)組明顯

6、升高(P＜0.05)，在傷后7天達(dá)到高峰值，直至傷后14天NgR表達(dá)仍處于峰值。
　　4.顱腦創(chuàng)傷后3d、7d和14d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，重度顱腦創(chuàng)傷組NgR表達(dá)均顯著高于輕度及中度創(chuàng)傷組(P＜0.05)，中度顱腦創(chuàng)傷組NgR表達(dá)也均顯著高于輕度創(chuàng)傷組(P＜0.05)。
　　5.Pearson直線相關(guān)分析顯示:在三種程度顱腦創(chuàng)傷模型中，Nogo-A和NgR表達(dá)變化均無明顯相關(guān)關(guān)系（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.顱

7、腦創(chuàng)傷后Nogo-A呈雙峰的表達(dá)規(guī)律，Nogo-A在創(chuàng)傷后急性期可能參與顱腦創(chuàng)傷的急性病理過程，在創(chuàng)傷修復(fù)期發(fā)揮抑制神經(jīng)再生的作用，為開辟顱腦創(chuàng)傷救治的新方法提供依據(jù)。
　　2.在不同程度的創(chuàng)傷腦組織中，Nogo-A的表達(dá)具有顯著性差異，Nogo-A有望成為判斷顱腦損傷程度的新指標(biāo)。
　　3.NgR在顱腦創(chuàng)傷的恢復(fù)期顯著升高，峰值持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，NgR介導(dǎo)顱腦創(chuàng)傷后神經(jīng)再生的抑制，阻礙神經(jīng)功能的恢復(fù)，為探尋顱腦創(chuàng)傷后神經(jīng)功能恢復(fù)