Nogo-A、NgR在急性和慢性高眼壓模型大鼠的視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中表達(dá)及作用的研究.pdf

1、背景: 各種青光眼的共同病理學(xué)機(jī)制是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retina ganglion cells，RGCs)的凋亡和神經(jīng)纖維的變性，從而造成不可逆的視功能損傷。由于多種因素的影響，如神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏，膠質(zhì)瘢痕形成以及髓鞘相關(guān)抑制蛋白再生抑制作用等，包括視神經(jīng)在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system，CNS)損傷后難以再生。已有研究證實髓鞘相關(guān)抑制蛋白Nogo—A是阻礙CNS損傷后神經(jīng)元存活和再生的重要因素之一。N

2、ogo—A是通過與受體復(fù)合物NgR/p75/Lingo—1的結(jié)合而發(fā)揮軸突再生抑制作用的，因此研究Nogo—A及其受體NgR在正常眼和高眼壓模型眼的視神經(jīng)和視網(wǎng)膜中表達(dá)情況，觀察阻滯髓鞘相關(guān)抑制蛋白的作用通路對青光眼性視神經(jīng)損傷的影響，有可能為青光眼視神經(jīng)損傷的治療提出新的思路。 目的: 1、了解髓鞘相關(guān)抑制蛋白Nogo—A及其受體NgR在正常成年大鼠視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中表達(dá)和分布的情況。 2、觀察Nogo—A及其受

3、體NgR的mRNA和蛋白在急性和慢性高眼壓模型大鼠視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中表達(dá)變化的情況。 3、探討NgR基因沉默對慢性高眼壓模型大鼠視神經(jīng)損傷后軸突再生的影響。 方法: 1、應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，了解Nogo—A及其受體NgR在正常成年大鼠視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中表達(dá)和分布的情況。 2、建立急性和慢性高眼壓大鼠模型。 3、應(yīng)用RT-PCR和Western Blot方法分別了解Nogo—A及其受體NgR在急性和慢

4、性高眼壓模型大鼠造模后不同時間視網(wǎng)膜和視神經(jīng)中轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)水平表達(dá)變化的情況。 4、采用siRNA玻璃體腔內(nèi)注射的方法，檢測特異性沉默NgR基因表達(dá)情況，應(yīng)用Western Blot方法觀察軸突再生特異性蛋白GAP—43表達(dá)的變化。 結(jié)果: 1、Nogo—A在正常成年大鼠的視神經(jīng)和視網(wǎng)膜的神經(jīng)纖維層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外叢狀層、外核層內(nèi)均有表達(dá)。NgR在正常成年大鼠的視神經(jīng)和視網(wǎng)膜的神經(jīng)纖維層、

5、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層內(nèi)表達(dá)。 2、急性高眼壓模型大鼠的視神經(jīng)和視網(wǎng)膜組織中Nogo—A mRNA及蛋白的表達(dá)在造模后1d、3d明顯增加(與對照組相比，P<0.05)，其后7d、14d又降至正常水平。慢性高眼壓模型大鼠視神經(jīng)和視網(wǎng)膜組織中Nogo—A mRNA及蛋白的表達(dá)在造模后3d即有增加，7d后增加顯著，并持續(xù)至造模后14d和28d(與對照組相比，P<0.05)。急性和慢性高眼壓模型大鼠造模后不同時間，NgRmRNA和蛋白在

6、視神經(jīng)和視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)未見明顯變化。 3、在慢性高眼壓模型大鼠中，于玻璃體腔內(nèi)注射特異siRNA干擾NgR基因表達(dá)，在mRNA及蛋白翻譯水平都實現(xiàn)了基因沉默，軸突再生特異性蛋白GAP—43的表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論: 1、Nogo—A及其受體NgR在正常成年大鼠的視神經(jīng)和視網(wǎng)膜中廣泛分布。 2、急性和慢性高眼壓可以促使大鼠Nogo—A mRNA和蛋白的表達(dá)上調(diào)，表明Nogo—A在高眼壓導(dǎo)致的視神經(jīng)損傷的神經(jīng)再