異丙酚對(duì)大鼠急性高眼壓模型的視神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：青光眼的病理基礎(chǔ)是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retina ganglion cells，RGCs)的進(jìn)行性病理死亡。而RGC的死亡常導(dǎo)致視功能發(fā)生不可逆性損害。青光眼視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞死亡的發(fā)病機(jī)制尚不明確。研究證實(shí)，免疫學(xué)因素參與了青光眼視神經(jīng)病變的病理生理過(guò)程，而視網(wǎng)膜固有的免疫活性細(xì)胞--小膠質(zhì)細(xì)胞更是近來(lái)研究的焦點(diǎn)?；罨蟮男∧z質(zhì)細(xì)胞對(duì)視神經(jīng)具有一定的保護(hù)作用，但也具有細(xì)胞毒性效應(yīng)。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，在缺血或者升高靜水壓的環(huán)境中，激活的小膠

2、質(zhì)細(xì)胞通過(guò)增加腫瘤壞死因子α(TNFα)的合成促進(jìn)了視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡。
　　 異丙酚是一種新型靜脈麻醉藥。近年研究表明異丙酚對(duì)腦、心臟等的缺血再灌注損傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用。它能顯著抑制大鼠腦缺血再灌注時(shí)TNFα的產(chǎn)生和釋放，保護(hù)腦組織[6]。國(guó)內(nèi)外關(guān)于異丙酚對(duì)高眼壓視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的作用罕見報(bào)道，而對(duì)急性高眼壓視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞及TNFα表達(dá)的影響未見報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)建立大鼠急性高眼壓模型，早期應(yīng)用異丙酚，觀

3、察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)，采用免疫組化及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)半定量測(cè)定視網(wǎng)膜中小膠質(zhì)細(xì)胞及TNFα的表達(dá)，探討異丙酚對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)，旨在探討青光眼視神經(jīng)損傷治療的新方法。
　　 方法：選取清潔級(jí)健康成年SD大鼠（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）35只，雌雄不限，體重200±20g，無(wú)眼疾。隨機(jī)分為正常對(duì)照組5只（5只眼）即右眼，損傷對(duì)照組15只（15只眼）即右眼高眼壓+生理鹽水腹腔注射組，異

4、丙酚治療組15只（15只眼）即右眼高眼壓+異丙酚腹腔注射組。損傷對(duì)照組和異丙酚治療組再按右眼高眼壓后注射時(shí)間隨機(jī)分為2h、48h和72h3小組，每小組5只。治療組分別于右眼高眼壓后2h、48h和72h給予異丙酚0.2ml(100mg/ml)消毒后腹腔注射，即20mg/鼠。損傷對(duì)照組相應(yīng)的給予生理鹽水0.2ml消毒后腹腔注射。各組大鼠均注射后6小時(shí)采用空氣栓塞法處死，隨即完整取出眼球及眶內(nèi)視神經(jīng)，固定，包埋，切片，用于HE染色后光鏡下視網(wǎng)

5、膜形態(tài)學(xué)變化的觀察和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)、免疫組化分析小膠質(zhì)細(xì)胞和TNFα在視網(wǎng)膜的表達(dá)情況。在同一光線強(qiáng)度、同一放大倍數(shù)，每張切片隨機(jī)選取10個(gè)視野用計(jì)算機(jī)-圖象分析儀將免疫組化切片圖象通過(guò)圖象采集系統(tǒng)輸入計(jì)算機(jī)，采用多功能真彩色細(xì)胞圖象分析管理系統(tǒng)(Image-ProPlus6.0)對(duì)圖象中的陽(yáng)性反應(yīng)部位進(jìn)行平均光密度分析，以陽(yáng)性細(xì)胞染色的平均光密度值來(lái)表示抗原表達(dá)量。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，單因素多組間的比較

6、用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、HE染色的視網(wǎng)膜切片形態(tài)觀察和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計(jì)數(shù)高眼壓損傷后2小時(shí)損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞病理形念無(wú)明顯改變，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞大小一致，輪廓規(guī)則，核清晰，細(xì)胞邊界清楚，未見空泡變性。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)纖維層、內(nèi)叢狀層輕度水腫。48小時(shí)損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小不一，輪廓不規(guī)則，核深染，部分神經(jīng)節(jié)纖維神層發(fā)生空泡變性。視網(wǎng)膜水腫減輕

7、。72小時(shí)損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小不一，輪廓不規(guī)則，部分胞核體積縮小，染色加深，呈核固縮形態(tài)，空泡變性加重，結(jié)構(gòu)較紊亂。48小時(shí)、72小時(shí)治療組的視網(wǎng)膜病理改變較同時(shí)間點(diǎn)損傷組明顯減輕。2小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜各層厚度末見明顯變化。(圖1-5)正常組切片每×400光鏡視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)30.4018個(gè)，損傷組2h、48h、72h每×400光鏡視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)分別為28.6

8、498個(gè)、23.7103個(gè)、16.7655個(gè)。治療組2h、48h、72h每×200光鏡視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)分別為29.4226個(gè)、26.0862個(gè)、19.7345個(gè)。2小時(shí)三組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞個(gè)數(shù)無(wú)顯著差異性(P＞0.05)。治療組48小時(shí)、72小時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞個(gè)數(shù)均高于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)兩組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間推移遞減，有顯著差異性(P＜0.05)。(Table1)

9、2視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞免疫組化染色正常組的視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層、內(nèi)、外叢狀層及外核層均有少量表達(dá)，外核層的陽(yáng)性細(xì)胞分布占主體，可見小膠質(zhì)細(xì)胞淡染，呈棕黃色。損傷組和治療組可見活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加。
　　 2、正常組視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值0.1528，損傷組2h、48h、72h視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值分別為0.2024、0.2581、0.3514。治療組2h、48h、72h視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值分別為0.1709、0.

10、2309、0.2962。除2小時(shí)治療組視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值較正常組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其余各個(gè)小組視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值較正常組有顯著差異(P＜0.05)。治療組2小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值均低于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)兩組視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞平均光密度值隨時(shí)間推移遞增，有顯著差異性(P＜0.05)。(Table2)3視網(wǎng)膜TNFα免疫組化染色

11、視網(wǎng)膜TNFα表達(dá)部位呈棕黃色。正常組TNFα表達(dá)較少，損傷組和治療組可見TNFα表達(dá)增強(qiáng)，主要散布于視網(wǎng)膜內(nèi)、外叢狀層及外核層，其他各層無(wú)明顯陽(yáng)性表達(dá)。
　　 3、正常組視網(wǎng)膜免疫組化切片中表達(dá)的TNFα平均光密度值0.2018，損傷組2h、48h、72h視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值分別為0.2498、0.3103、0.3655。治療組2h、48h、72h視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值分別為0.2226、0.2862、0.3345。

12、除2小時(shí)治療組視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值較正常組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其余各個(gè)小組視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值較正常組有顯著差異(P＜0.05)。治療組2小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值均低于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)兩組視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值隨時(shí)間推移遞增，有顯著差異性(P＜0.05)。（Table3）
　　 結(jié)論：
　　 1、小膠質(zhì)細(xì)胞及腫瘤壞