重組人白細胞介素-2對大鼠慢性高眼壓視神經損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：探討大鼠玻璃體腔注射重組人白細胞介素2（recombinant human interleukin-2，rhIL-2）對Wistar大鼠慢性高眼壓視網膜神經節(jié)細胞（retinal ganglion cells RGCs）損傷的保護作用及其是否通過巨噬細胞和信號傳導途徑起作用。 方法：采用532nm二極管激光燒灼Wistar大鼠3/4周角鞏膜緣淺層靜脈，阻斷房水回流的方法建立大鼠慢性高眼壓模型。（1）12只大鼠右眼建立模型，

2、按建模成功后在不同時間分為1d，3d，1w，2w，4w，8w分別觀察眼壓變化情況，第8周處死摘除眼球行HE染色。（2）64只大鼠隨機分為正常對照組、單純高眼壓模型組、溶劑（PBS）組和rhIL-2治療組。正常對照組不作任何處理，其余組建立慢性高眼壓模型，模型建立1周后，玻璃體腔內分別注射2μl PBS液或2μl rhIL-2，每組再分為3d，7d，14d，21d四個時間點，其中48只大鼠于處死前7天采用雙上丘注射3％熒光金逆行標記，RG

3、Cs視網膜鋪片行熒光照相，并輸入計算機圖像分析儀行視網膜神經節(jié)細胞計數；其中另外16只大鼠免疫熒光檢測ED-1陽性巨噬細胞。（3）48只大鼠隨機分為正常對照組、單純高眼壓模型組、rhIL-2治療組和rhIL-2、LY294006、AG490混合液組，模型建立成功1周后，玻璃體腔內分別注射2μl PBS液，rhIL-2或信號轉導阻斷劑LY29400，AG490與rhIL-2混合液，大鼠Western blot檢測用藥后3h，12h，24h

4、，96h不同時間PI3K/Akt、Jak/Stat3通路的激活情況；另外12只rhIL-2、LY294006、AG490混合液組大鼠分為3天，7d，14d，21d四個時間點，于處死前7天采用同樣方法行視網膜神經節(jié)細胞計數。 結果：（1）激光燒灼法阻斷大鼠角鞏膜緣3/4周鞏膜淺層靜脈，慢性高眼壓模型制作后大鼠右眼眼壓較造模前明顯升高（P<0.01），正常對照組眼壓在模型建立前后無明顯變化（P>0.05）。HE染色大鼠右眼視網膜神經

5、節(jié)細胞計數與其正常對照組左眼比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01）。（2）正常對照組，高眼壓模型組及PBS組視網膜內均未見ED-1陽性巨噬細胞，rhIL-2治療組視網膜內可見ED-1陽性巨噬細胞表達。（3）高眼壓模型成功建立后模型組RGCs密度隨著時間延長逐漸減少，各時間點計數有顯著差異（P<0.01）。rhIL-2治療組在注藥后3d，7d，14d，21d逆行標記的RGCs分別為182.23±7.16（個/4視野），186.74±8

6、.78（個/4視野），188.53±12.99（個/4視野），190.54±10.39（個/4視野），均顯著高于高眼壓模型組（P<0.01）。PBS溶劑組RGCs數與高眼壓模型組相近無顯著差異（P>0.05）。rhIL-2、LY294006、AG490混合液組玻璃體腔注射后熒光金標記RGCs計數均顯著低于單獨rhIL-2玻璃體腔注射組（P<0.01）。（4）rhIL-2組在玻璃體腔注射后不同時間，可見視網膜AKT，STAT3蛋白表達的變

7、化，3h組可見AKT，STAT3蛋白少量表達與正常對照組無顯著差異（P>0.05），12h時AKT，STAT3蛋白表達水平增強，與正常對照組比較具有顯著性差異（P<0.01），24h以后下降，與正常對照組比較具有顯著性差異（P<0.01），96h仍有少量表達。 結論：（1）采用532nm激光燒灼大鼠角鞏膜緣淺層靜脈可成功地建立穩(wěn)定的大鼠慢性高眼壓模型。（2）玻璃體腔內注射rhIL-2能夠抑制慢性高眼壓RGC層神經元的凋亡，起到保