重組人白細(xì)胞介素-11工程菌的發(fā)酵條件研究.pdf

1、為了探討發(fā)酵條件對(duì)大腸桿菌表達(dá)人白細(xì)胞介素-11融合蛋白的影響，利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響工程菌的生長(zhǎng)及重組人白細(xì)胞介素11融合蛋白的表達(dá)因素如培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度、蛋白胨濃度、酵母提取物濃度、無(wú)機(jī)鹽濃度、pH及搖床轉(zhuǎn)速、裝液量、接種量等在搖瓶中進(jìn)行了初步的研究。確定了工程菌生長(zhǎng)及表達(dá)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：葡萄糖lOg／L，蛋白胨20g／L，酵母提取物lOg／L，NaC110.0 g／L，KH<,2>PO<,4> 6.0 g／L，K<,2>

2、HPO<,4>3.5 g／L，MgSO<,4>3.5g／L，pH7.5，接種量10％，裝液量10％，搖床轉(zhuǎn)速220r／min及IPTG濃度0.8 mmol／L，誘導(dǎo)時(shí)間為4h-5h。研究了乙酸對(duì)重組菌生長(zhǎng)及外源基因蛋白表達(dá)的影響；同時(shí)對(duì)重組菌培養(yǎng)過(guò)程中乙酸生成機(jī)制進(jìn)行研究，得出供氧不足及過(guò)量的葡萄糖是導(dǎo)致重組菌代謝產(chǎn)生乙酸的兩個(gè)極為重要的因素。結(jié)果表明，乙酸的存在不僅導(dǎo)致重組菌生長(zhǎng)速率的降低及延遲的增長(zhǎng)，而且對(duì)外源基因產(chǎn)物的表達(dá)具有強(qiáng)烈

3、的抑制作用。這為工程菌的高密度培養(yǎng)及外源基因的高表達(dá)打下了基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上，并在NBS BiofloⅢ-5L發(fā)酵罐中研究了重組菌的分批培養(yǎng)、重組菌的不控制溶氧的補(bǔ)料培養(yǎng)、重組菌的“平衡DO-stat”法補(bǔ)料培養(yǎng)，最后采用“平衡DO-stat”法調(diào)控補(bǔ)糖速率，抑制了培養(yǎng)過(guò)程中的乙酸生成，實(shí)現(xiàn)了重組菌的高密度培養(yǎng)表達(dá)，培養(yǎng)表達(dá)生物量達(dá)到55g/L(DCW)，重組人IL-11融合蛋白表達(dá)量達(dá)到33％左右。并考察了重組菌在高密度培養(yǎng)過(guò)程中質(zhì)粒的