大鼠急性高眼壓后視網(wǎng)膜p-STAT3和MMP-9的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:檢測急性高眼壓后，大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子3（p-STAT3）蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的動態(tài)變化。探討p-STAT3和MMP-9與視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 方法:正常成年SD大鼠35只（山東大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供），體重（200±25）g，雌雄不限。隨機(jī)分成5組，分別為高眼壓后6h、12h、24h、48h和72h組，每組7只，任選一眼為手術(shù)眼，另一眼為自身對照組。1％異戊巴比妥鈉30mg·kg-1

2、腹腔注射全麻，利用前房高壓灌注法造成大鼠視網(wǎng)膜缺血60min，解除高眼壓，建立急性高眼壓缺血再灌注模型，并于急性高眼壓后6h、12h、24h、48h和72h4％多聚甲醛大鼠心臟灌注固定，摘取眼球。4％多聚甲醛固定液固定24h，制備石蠟眼球標(biāo)本。采用免疫組化SP法檢測大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)p-STAT3和MMP-9蛋白表達(dá)。一抗為兔抗鼠p-STAT3單克隆抗體（Cell Signal，1：200）和兔抗鼠MMP-9多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限

3、公司，1：200），二抗山羊抗兔IgG，0．05％二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（DAB）顯色試劑顯色。經(jīng)p-STAT3、MMP-9免疫組織化學(xué)染色的視網(wǎng)膜切片，用LEICA IM50型全自動醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測量其平均光密度值。數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，結(jié)果以SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析t檢驗(yàn)。以P<0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果: 1．正常視網(wǎng)膜p-STAT3和MMP-9呈弱陽性表達(dá)。 2．p-STAT3陽性染色表達(dá)于急

4、性高眼壓6h出現(xiàn)，12h達(dá)高峰，24h后表達(dá)含量逐漸下降，72h接近正常。陽性表達(dá)主要位于視網(wǎng)膜內(nèi)核層和節(jié)細(xì)胞胞核。 3．MMP-9陽性染色表達(dá)于急性高眼壓6h出現(xiàn)，24h達(dá)高峰，48h后表達(dá)含量逐漸下降，72h接近正常。陽性表達(dá)主要位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿和內(nèi)叢狀層。 結(jié)論: 1．本實(shí)驗(yàn)證明在急性高眼壓損傷過程p-STAT3，MMP-9均發(fā)生了表達(dá)變化，二者共同參與急性高眼壓視網(wǎng)膜缺血再灌注的病理改變。 2．