bFGF在慢性高眼壓動(dòng)物模型中對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及視神經(jīng)的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究在兔慢性高眼壓動(dòng)物模型中，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及視神經(jīng)的保護(hù)作用。 方法：健康新西蘭大白兔13只(26眼)，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(12只，12眼)和對(duì)照組(12只，12眼)，用前房注射羥丙基甲基纖維素(HPMC)法制成慢性高眼壓動(dòng)物模型。每只兔隨機(jī)一眼為實(shí)驗(yàn)組，分別于建模同時(shí)及建模后1周、2周、3周重復(fù)玻璃體腔內(nèi)注射bFGF0.1ml(2000UbFGF溶于0.1ml，0.1mol/1的PBS

2、中，PH為7.2)；另一眼為對(duì)照組，分別于建模同時(shí)及建模后l周、2周、3周玻璃體腔內(nèi)注射等體積的PBS。另外一只兔不做任何注射為正常對(duì)照組(2眼)。術(shù)后每日固定時(shí)間測(cè)量眼壓，如測(cè)IOP連續(xù)兩日低于30mmHg，即重復(fù)行前房?jī)?nèi)注射2％HPMC。分別于建模同時(shí)及建模后第7、14、21、28天行眼底照相及全視野視網(wǎng)膜電圖(F-ERG)檢查。并分別于建模后7、14、21、28天隨機(jī)處死3只兔子。完整摘出眼球行常規(guī)HE染色觀察視網(wǎng)膜及視神經(jīng)的形態(tài)

3、變化并計(jì)數(shù)存活的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目。建模后28天行電鏡觀察視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及視神經(jīng)纖維超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果：眼部表現(xiàn)：各組兔子術(shù)后均可見(jiàn)不同程度炎性反應(yīng)，如結(jié)膜充血、角膜水腫等，術(shù)后7天均可消退。術(shù)后眼壓：兩組兔子術(shù)后眼壓穩(wěn)定，基本可以維持在30mmHg以上，平均持續(xù)6～7天。建模前后各時(shí)期對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組眼壓比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。眼底改變：7d照相顯示兩組眼底尚正常；14d對(duì)照組可見(jiàn)視乳頭凹陷開(kāi)始加深、顏色變淡，血管開(kāi)始出

4、現(xiàn)移位；21d對(duì)照組視乳頭凹陷明顯擴(kuò)大，血管明顯屈膝，實(shí)驗(yàn)組可見(jiàn)視乳頭凹陷加深，但血管尚無(wú)明顯改變；28d時(shí)，對(duì)照組可見(jiàn)血管明顯屈膝、變細(xì)，實(shí)驗(yàn)組開(kāi)始出現(xiàn)血管屈膝現(xiàn)象。7天時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間CD/DAR值比較或者分別與建模前比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。從第14天開(kāi)始實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組CD/DAR值分別較建模前增大且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 電生理觀察：在暗視視桿細(xì)胞反應(yīng)、暗

5、視視桿細(xì)胞一視錐細(xì)胞混合反應(yīng)、暗視振蕩電位、明視單次閃光視錐細(xì)胞反應(yīng)及明視30Hz閃爍光視錐細(xì)胞反應(yīng)5個(gè)全視野視網(wǎng)膜電圖標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試中可觀察到：對(duì)照組均出現(xiàn)振幅降低，隱含期延長(zhǎng)，0ps波及b波在7天出現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改變，a波則在21天時(shí)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的改變。7天后對(duì)照組均較實(shí)驗(yàn)組a波、b波、0ps總振幅降低，峰潛時(shí)延遲且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，對(duì)照組或?qū)嶒?yàn)組個(gè)時(shí)間段之間兩兩比較各振幅、峰潛時(shí)延遲程度隨時(shí)間的延長(zhǎng)均加重且存在統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)差異(P<0.05)。病理學(xué)觀察：光鏡：正常對(duì)照組兔子視網(wǎng)膜顯示清晰的結(jié)構(gòu)：內(nèi)界膜層、神經(jīng)纖維層、神經(jīng)纖維節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外叢狀層、外核層。神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層節(jié)細(xì)胞分布均勻、緊密，形態(tài)、大小近似。視神經(jīng)纖維排列整齊、間隔均勻。建模后7天開(kāi)始，對(duì)照組視神經(jīng)纖維層變薄，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列稀疏，數(shù)目較正常組下降(P<0.05)；視神經(jīng)纖維橫切面可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞排列紊亂、神經(jīng)纖維腫脹，數(shù)目較正常組下降(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組視神經(jīng)纖維層尚無(wú)明顯

7、變化，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及視神經(jīng)計(jì)數(shù)較對(duì)照組的數(shù)目多，兩組間比較有明顯差異(P<0.01)。第四周，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目明顯減少，且可見(jiàn)節(jié)細(xì)胞凋亡后剩余的固縮的細(xì)胞核。視神經(jīng)纖維橫斷面可出現(xiàn)大量空泡，可見(jiàn)脫髓殼樣變；但對(duì)照組幾乎不能見(jiàn)到神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，可見(jiàn)視神經(jīng)纖維大片壞死，膠質(zhì)細(xì)胞增生。兩組節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維數(shù)目比較有非常顯著性差異(P<0.001)。內(nèi)核層細(xì)胞層數(shù)僅約2～3層，細(xì)胞排列稀疏。RGCs減少率與ERG的關(guān)系中顯示0ps波在RGCs減少

8、20.12％時(shí)即出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)改變。電鏡：術(shù)后28d可見(jiàn)對(duì)照組胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量減少、線粒體空泡變性、軸突排列紊亂、髓鞘變性；但實(shí)驗(yàn)組仍有散在細(xì)胞器、髓鞘相對(duì)不規(guī)則、軸突內(nèi)微管和微絲腫脹、但不消失。 結(jié)論：1.眼壓、眼底照相、全視野視網(wǎng)膜電圖及病理學(xué)改變證實(shí)慢性高眼壓模型建模成功。 2.在慢性高眼壓模型中隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，有明顯的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞死亡及視神經(jīng)纖維變性，提示高眼壓為神經(jīng)節(jié)細(xì)胞死亡及視神經(jīng)纖維變性的一個(gè)重要原因。