睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子在慢性高眼壓模型中對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究在高眼壓動物模型中，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用 方法：健康新西蘭大白兔13只，隨機(jī)分為A、B、C、D四組，每組3只，用前房注射羥甲基纖維素法制成慢性高眼壓動物模型，分別觀察7天(A組)、14天(B組)、2l天(C組)、28天(D組)。每只兔一眼為實(shí)驗(yàn)組，玻璃體腔內(nèi)注射睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，另一眼為對照組玻璃體腔內(nèi)注射等體積生理鹽水；另外一只兔為正常對照(2眼)。術(shù)后每同固定時(shí)間觀察眼壓。如測IOP

2、連續(xù)兩日低于30mmHg，即行前房內(nèi)羥甲基纖維素注射，實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后1周、2周、3周分別重復(fù)玻璃體腔內(nèi)注射5ug/ml的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子0.1ml，對照組加注同等劑量的林格式液。分別于術(shù)后7、14、21、28天行眼底照相。術(shù)后第7天處死A組兔子；術(shù)后第14天處死B組兔子：術(shù)后第2l天處死C組兔子；術(shù)后第28天處死D組兔子。完整摘出眼球行常規(guī)HE染色觀察視網(wǎng)膜的形態(tài)變化并計(jì)數(shù)存活的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，用蛋白印跡法測定視網(wǎng)膜中CNTFRα蛋白的表達(dá)。

3、 結(jié)果：眼部表現(xiàn)：各組兔子術(shù)后可見炎性反應(yīng)，如結(jié)膜充血、角膜水腫。5只兔子可見前房內(nèi)滲出，2只見前房出血。但都于術(shù)后5～7天吸收。術(shù)后眼壓：各組兔子術(shù)后眼壓穩(wěn)定，基本可以維持在30mmHg以上，平均持續(xù)5～6天。建模前后各時(shí)期對照組與實(shí)驗(yàn)組眼壓比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。眼底改變：兔子7d照相顯示兩組眼底尚正常；14d對照組可見血管移位，視乳頭色淡；21d對照組視乳頭凹陷明顯擴(kuò)大，血管屈膝，實(shí)驗(yàn)組可見視乳頭凹陷加深，但

4、血管形態(tài)尚正常；28d時(shí)，對照組可見視乳頭出血，實(shí)驗(yàn)組開始出現(xiàn)血管屈膝現(xiàn)象。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，建模前及建模后7天，杯盤比兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，14天后杯盤比，對照組較實(shí)驗(yàn)組擴(kuò)大(P<0.05)。病理學(xué)觀察：正常對照組兔子視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞分布均勻、緊密，形態(tài)、大小近似平均數(shù)目(17.90±2.23)/mm<'2>。建模后7天，對照組神經(jīng)纖維層變薄，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列稀疏，數(shù)目(11.70±1.34)/mm<'2>，較正常組下降(

5、p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組為(14.20±1.93)/mm<'2>，較對照組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的存活多，兩組間節(jié)細(xì)胞數(shù)目比較有明顯差異(p<0.01)。第四周，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目僅為(5.30±1.25)/mm<'2>。且可見節(jié)細(xì)胞凋亡后剩余的固縮的細(xì)胞核(箭頭所示)，但對照組幾乎不能見到神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(2.30±0.82)/mm<'2>，兩組比較有非常顯著性差異(p<0.001)。內(nèi)核層細(xì)胞層數(shù)僅約2～3層，細(xì)胞排列稀疏。CNTFa蛋白電泳：用兔抗

6、人、兔、大鼠、小鼠CNTFRa抗體識別CNTFa蛋白，分子量約為55KD。正常組僅有少量CNTF a蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組視網(wǎng)膜中CNTF a蛋白從第一周開始升高，第二周CNTF a蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)，到第三周達(dá)到高峰(P<0.01)，第四周開始消退。對照組CNTF a蛋白第一周表達(dá)開始出現(xiàn)減少，以后各組相對比較逐漸下降，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且對照組與實(shí)驗(yàn)組比較，CNTF a蛋白減低(P<0.01)。