丁苯酞對EAE大鼠的干預(yù)作用及NFP、survivin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究丁苯酞（Butylphthalide， NBP）對實驗性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠的造模干預(yù)作用機(jī)制和對神經(jīng)絲蛋白（Neuroflilament protein，NFP）及survivin表達(dá)的影響，從而為臨床治療多發(fā)性硬化（multiple sclerosis,MS）尋求新的途徑。
　　方法：
　　利用自制完全抗原以皮下注射

2、免疫誘導(dǎo)EAE模型。72只成年雌性SD大鼠完全隨機(jī)分為正常對照組(N組)、EAE組、小劑量丁苯酞干預(yù)組（NBP1組)、大劑量丁苯酞干預(yù)組（NBP2組)，各組18只。在抗原免疫后根據(jù)時間不同將N組、EAE組、NBP1組、NBP2組在各自組內(nèi)又隨機(jī)分為3個亞組，每個亞組6只，分別于第7天、第14天、第21天處死。丁苯酞干預(yù)組于模型制備后當(dāng)天給予NBP1組30mg/kg.d、NBP2組60mg/kg.d的劑量藥物灌胃，N組和EAE組則給予1

3、mL·100 g-1劑量的食用麻油灌胃，每天一次至處死為止。比較各組發(fā)病率及神經(jīng)功能評分，取脊髓組織行改良Bielschowsky銀染色，免疫組化方法檢測脊髓NFP和survivin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.動物發(fā)病率觀察：正常組無大鼠發(fā)病，EAE組、NBP1組、NBP2發(fā)病率分別為88.89％、55.56%、22.22%， EAE組的發(fā)病率均明顯高于NBP1組、NBP2組（χ2=4.985，P=0.030；χ2=1

4、8.836，P=0.000），NBP2組發(fā)病率明顯低于 NBP1組發(fā)病率（χ2=5.900，P=0.018）。
　　2.神經(jīng)功能評分：丁苯酞干預(yù)劑量越大，干預(yù)時間越長，神經(jīng)功能評分越低，神經(jīng)功能缺損程度改善越明顯。7d時間點，各組神經(jīng)功能評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；14d時間點，NBP1組、NBP2組神經(jīng)功能評分明顯低于EAE組（P<0.05），其中NBP2組較 NBP1組改善更明顯（P<0.05）；21d時間點，NBP

5、1組、NBP2組與EAE組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但NBP1組與NBP2組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　3. Bielschowsky銀染色觀察：N組軸索絕大多數(shù)粗細(xì)均勻，走行方向較一致，軸索的連續(xù)性完好。EAE組內(nèi)明顯呈空泡樣改變的銀染色缺失病灶，軸索斷裂、排列紊亂嚴(yán)重，明顯粗細(xì)不均。NBP1組病變稍有減輕，軸索排列紊亂明顯，走行不一致，空泡樣改變減少。NBP2組見軸索排列輕度紊亂，輕度粗細(xì)不均，軸索連續(xù)性

6、尚好，散在空泡樣改變。
　　4.免疫組織化學(xué)染色：
　　4.1脊髓組織NFP表達(dá)：三個不同時間點，正常組高水平表達(dá)，NBP2組次之，NBP1組中度表達(dá)，EAE組低水平表達(dá)。7d、14d、21d時間點，正常組、NBP1組、NBP2組均明顯高于EAE組（P<0.05）；NBP1組與NBP2組在14d時間點，差異明顯（P<0.05）,但在7d、21d時間點，二者沒有明顯差異（P>0.05）；同組不同時間，正常組、NBP2組變化不明

7、顯（P>0.05），EAE組、NBP1組均在14d時間點出現(xiàn)表達(dá)明顯下降（P<0.05），21d時間點恢復(fù)到7d時間點水平左右（P>0.05）；
　　4.2脊髓survivin表達(dá)：三個不同時間點，正常組無表達(dá)，EAE組低水平表達(dá)，丁苯酞干預(yù)后，NBP1組、NBP2組均呈明顯的遞增趨勢。丁苯酞干預(yù)劑量越大，干預(yù)時間越長，表達(dá)越多。7d、14d、21d三個時間點，NBP1組、NBP2組均明顯高于 EAE組（P<0.05），7d時間點

8、 NBP1組與NBP2組無明顯差異（P>0.05），14d、21d時間點，NBP2組明顯高于NBP1組（P<0.05）。同組不同時間點，EAE組變化不明顯（P>0.05），而NBP1組、NBP2遞增趨勢明顯（P<0.05）且各時間點兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、丁苯酞在 EAE發(fā)病前干預(yù)能降低EAE大鼠發(fā)病率，改善神經(jīng)功能缺損程度，發(fā)揮的效應(yīng)與劑量有關(guān)。
　　2、丁苯酞干預(yù)后對EA