補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方對EAE大鼠的防治作用和對IL-6、TGF-β影響的研究.pdf

1、目的：觀察不同劑量的補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）Wistar大鼠的發(fā)病情況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）病理學(xué)改變及發(fā)病過程中血清白介素（IL）-6和轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β）的影響，探討其對MS的影響及可能的免疫學(xué)機(jī)制，為尋求中醫(yī)藥治療多發(fā)性硬化提供有意義的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　?。?）EAE模型的建立：采用豚鼠脊髓勻漿(GPSCH）、完全弗氏佐劑(CFA）、百日咳疫苗原漿液（PV）作抗原，致敏

2、雌性Wistar大鼠建立急性EAE模型，觀察免疫后大鼠的發(fā)病情況，記錄每日體重并進(jìn)行神經(jīng)功能評分。
　　（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥：90只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：空白組（無干預(yù)）、佐劑組（CFA+PV+NS）、模型組（GPSCH+CFA+PV+NS）、中藥高劑量組
　?。‥AE+60g/kg/d）、中藥中劑量組（EAE+30g/kg/d）、中藥低劑量組（EAE+15g/kg/d），每組各15只，自免疫當(dāng)天起持續(xù)每日灌

3、胃給藥至實(shí)驗(yàn)終止。
　?。?）各組動(dòng)物臨床體征觀察：免疫當(dāng)天起每日兩次觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)病情況，以0.5天為單位記錄大鼠發(fā)病的發(fā)病起始時(shí)間（潛伏期），并記錄大鼠的發(fā)病數(shù)、體重及神經(jīng)功能評分。
　　（4）樣本采集：采用眼眶后靜脈叢采血法于免疫后第14天（發(fā)病高峰期）和21天（發(fā)病緩解期）采取靜脈血，分離出血清備測；心腔灌流后取腦、脊髓置于4％多聚甲醛中固定，用石蠟包埋、切片。
　?。?）指標(biāo)檢測：蘇木素-伊紅（HE）法染色觀

4、察腦、脊髓病理學(xué)改變；ELISA法測定血清內(nèi)白介素-6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)含量。
　?。?）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。采用SPSS19.0軟件包行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析。
　　結(jié)果：
　?。?）大鼠發(fā)病率、潛伏期、臨床評分和體重變化：空白組及佐劑組無發(fā)病，補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方高、中、低劑量組大鼠的發(fā)病率與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方中劑量組大鼠的平均潛伏期較模型組明顯延長；補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方高、中劑量組大鼠發(fā)病高峰期

5、、發(fā)病緩解期的平均體重稍高于模型組、中藥低劑量組；補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方中劑量組大鼠發(fā)病高峰期、發(fā)病緩解期的神經(jīng)功能評分明顯低于模型組。
　?。?）組織病理學(xué)觀察對比：空白組、佐劑組大鼠腦和脊髓未發(fā)現(xiàn)炎性病灶，模型組大鼠高峰期可見腦及脊髓實(shí)質(zhì)內(nèi)小血管擴(kuò)張、充血，血管四周有大量炎細(xì)胞浸潤，形成“袖套”狀改變。發(fā)病高峰期補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方高、中、低劑量組大鼠CNS中炎性病灶數(shù)與模型組相比顯著減少，中藥高劑量組少于低劑量組，高、中劑量組之間無顯著差

6、異；發(fā)病緩解期補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方高、中劑量組大鼠CNS中炎性病灶數(shù)與模型組相比顯著減少，中藥低劑量組與模型組相比無顯著差異，與高劑量組相比，中藥低劑量組平均病灶數(shù)明顯增多，中藥高、中劑量組相比無明顯差異性。
　?。?）血清中IL-6、TGF-β的表達(dá)：與空白組相比，模型組、中藥低劑量組大鼠發(fā)病高峰期及緩解期血清中IL-6的表達(dá)水平均有顯著性差異，余無明顯差異；發(fā)病高峰期與模型組相比，各組大鼠血清中IL-6的含量顯著降低，差異顯著，緩解

7、期與模型組相比，除外中藥低劑量組，其余各組大鼠發(fā)病緩解期IL-6的表達(dá)水平均降低，具有顯著性差異；佐劑組、模型組和中藥高、低劑量組大鼠血清中IL-6的表達(dá)水平緩解期較高峰期明顯下降，差異顯著。
　　在發(fā)病高峰期，與空白組相比，佐劑組、模型組大鼠血清中TGF-β的表達(dá)明顯降低，有顯著性差異；與模型組相比，除外佐劑組，其余各組TGF-β的表達(dá)水平存在明顯差異；中藥各劑量組分別與模型組、佐劑組相比，血清TGF-β含量均增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

8、。發(fā)病緩解期：中藥中劑量組血清TGF-β含量較模型組顯著升高，其余各組間無顯著差異。
　　結(jié)論：
　?。?）聯(lián)合應(yīng)用豚鼠全脊髓勻漿液、完全福氏佐劑和百日咳疫苗原漿液的方法，能夠成功誘導(dǎo)Wistar大鼠建立EAE模型，發(fā)病率高。
　?。?）補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方能明顯降低急性EAE大鼠的發(fā)病率、緩解臨床癥狀、縮短病程。并能減輕EAE大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥，保護(hù)大鼠神經(jīng)功能。
　　（3）補(bǔ)腎解毒通絡(luò)方對于MS作用的部分機(jī)制可能