解毒通絡(luò)方與補(bǔ)腎益氣方對(duì)EAE大鼠免疫系統(tǒng)和中樞髓鞘再生的影響.pdf

1、目的多發(fā)性硬化(MultipleSclerosis，MS)是以中樞神經(jīng)炎性脫髓鞘為主要特征的自身免疫性疾病。雖然第一例多發(fā)性硬化報(bào)道已經(jīng)一百余年，但至今對(duì)其病因及病機(jī)仍不十分清楚，因此也無(wú)理想的防治措施。最新研究表明，樹(shù)突狀細(xì)胞在多發(fā)性硬化的發(fā)病及激活異常淋巴細(xì)胞增殖過(guò)程中發(fā)揮了主導(dǎo)作用，并與疾病過(guò)程中中樞神經(jīng)病灶免疫炎性反應(yīng)的持續(xù)和反復(fù)發(fā)作關(guān)系密切。成為防治多發(fā)性硬化研究關(guān)注的焦點(diǎn)。中醫(yī)藥在治療多發(fā)性硬化癥方面近年來(lái)取得了可喜的苗頭，

2、中醫(yī)學(xué)者根據(jù)對(duì)多發(fā)性硬化的不同見(jiàn)解在臨床辯證論治中提出了多種治療方案，其中補(bǔ)益法和解毒法在治則上迥然不同，為此，我們根據(jù)中醫(yī)理論及臨床實(shí)踐，組方了解毒通絡(luò)及補(bǔ)腎益氣兩種組方，對(duì)比觀察其對(duì)EAE大鼠的組織病理、樹(shù)突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞增殖及中樞髓鞘再生的影響。擬通過(guò)本研究進(jìn)一步揭示多發(fā)硬化的發(fā)病機(jī)制；研究探討中醫(yī)治療多發(fā)性硬化的作用機(jī)制和環(huán)節(jié)；為臨床治療多發(fā)性硬化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法1.用Lewis大鼠建立了EAE模型，觀察各組動(dòng)物行

3、為學(xué)變化； 2.對(duì)EAE大鼠脊髓組織進(jìn)行HE染色和LuxolFastBlue髓鞘染色； 3.對(duì)EAE大鼠誘導(dǎo)發(fā)病多個(gè)環(huán)節(jié)的相應(yīng)器官組織(足部抗原注射部位皮下組織、淋巴結(jié)、脾臟)行HE染色、病理學(xué)觀察。 4.用免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組EAE大鼠淋巴結(jié)、脾臟組織OX-62的表達(dá)，并用BrdU摻入法配合免疫組織化學(xué)法對(duì)淋巴結(jié)、脾、淋巴細(xì)胞的增殖水平進(jìn)行了觀察分析。 5.用免疫組織化學(xué)檢測(cè)了各組EAE大鼠脊髓室管膜細(xì)

4、胞增殖和脊髓組織CNP的表達(dá) 結(jié)果1.解毒通絡(luò)方使EAE大鼠發(fā)病高峰期體征評(píng)分增高，恢復(fù)期有復(fù)發(fā)。在EAE發(fā)病早期，脊髓組織病灶區(qū)炎細(xì)胞面密度值即明顯增高，血管壁損傷較早出現(xiàn)，病理?yè)p傷較重。解毒通絡(luò)組雖然可降低脾組織BrdU陽(yáng)性淋巴細(xì)胞面密度值，但同時(shí)在早期也使脊髓病灶區(qū)BrdU陽(yáng)性炎細(xì)胞面密度值明顯升高。 2.補(bǔ)腎益氣組在發(fā)病高峰期臨床體征評(píng)分和脊髓病灶區(qū)炎細(xì)胞面密度值均明顯降低，脾組織和脊髓病灶區(qū)BrdU面密度值均有

5、所降低，但在晚期病理改變有所加重，脊髓病灶區(qū)BrdU陽(yáng)性炎細(xì)胞面密度值明顯增高，有復(fù)發(fā)。 3.EAE大鼠足底抗原注射部位皮下組織、腹股溝淋巴結(jié)、脾組織和脊髓組織中均有OX-62陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)。在淋巴結(jié)髓索和脾索中出現(xiàn)的OX-62陽(yáng)性細(xì)胞分為大、小兩種類型。大型細(xì)胞數(shù)目少但分布廣為樹(shù)突狀細(xì)胞，小型細(xì)胞數(shù)量眾多為γδT細(xì)胞。解毒通絡(luò)組和補(bǔ)腎益氣組對(duì)OX-62陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)沒(méi)有明顯的影響。 4.對(duì)EAE大鼠發(fā)病后淋巴結(jié)組織病理

6、學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)淺層皮質(zhì)出現(xiàn)大小不等的斑片狀壞死區(qū)，在壞死區(qū)中可見(jiàn)多個(gè)巨大的上皮樣多核巨噬細(xì)胞吞噬溶解淋巴細(xì)胞，清除局部淋巴結(jié)以后自身退化為上皮樣支架結(jié)構(gòu)。 5.EAE大鼠淋巴結(jié)組織BrdU陽(yáng)性細(xì)胞集中分布于淋巴結(jié)髓質(zhì)和皮質(zhì)淋巴小結(jié)生發(fā)中心；副皮質(zhì)區(qū)和小結(jié)間淺層皮質(zhì)分布稀疏。 6.組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，EAE大鼠發(fā)病后脊髓室管膜細(xì)胞大量增殖并有BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，其增殖程度與EAE大鼠脊髓病變的嚴(yán)重程度和部位關(guān)系密切。

7、 7.正常和EAE大鼠脊髓組織少突膠質(zhì)細(xì)胞和髓鞘組織均為CNP陽(yáng)性表達(dá)，在EAE大鼠脊髓組織免疫炎性病灶周?chē)鷦t呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。解毒通絡(luò)方使EAE大鼠脊髓CNP面密度降低，補(bǔ)腎益氣方對(duì)CNP的表達(dá)沒(méi)有明顯的影響。 結(jié)論1.EAE大鼠抗原注射部位持續(xù)的免疫炎性反應(yīng)，使樹(shù)突狀細(xì)胞在局部聚集、攝取抗原的過(guò)程持續(xù)存在，是EAE大鼠復(fù)發(fā)的主要根源。 2.以脾組織BrdU陽(yáng)性細(xì)胞面密度值并參照脊髓組織病灶區(qū)浸潤(rùn)的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞面密

8、度值做為評(píng)估外周淋巴細(xì)胞的增殖水平的方法，能較準(zhǔn)確地反映EAE大鼠免疫系統(tǒng)被激活的狀態(tài)。為研究自身免疫性疾病淋巴細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的增殖水平提供了新方法。 3.根據(jù)淋巴結(jié)內(nèi)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的分布和密集程度，將淋巴結(jié)分為增殖區(qū)和成熟區(qū)。在與皮質(zhì)區(qū)和髓質(zhì)區(qū)相貼的被膜下淋巴竇均發(fā)現(xiàn)有OX-62陽(yáng)性細(xì)胞，髓質(zhì)區(qū)和小結(jié)間淺層皮質(zhì)都是樹(shù)突狀細(xì)胞首先進(jìn)行抗原呈遞的部位。 4.在EAE大鼠發(fā)病過(guò)程中，淋巴結(jié)皮質(zhì)區(qū)出現(xiàn)巨大的上皮樣多核巨噬細(xì)胞

9、，是由許多巨噬細(xì)胞融合而形成的，可清除過(guò)度增殖的淋巴細(xì)胞。 5.EAE大鼠肢體麻痹可能是由三種病理改變引起：①脊髓白質(zhì)脫髓鞘；②脊髓灰質(zhì)前角受累；③周?chē)窠?jīng)免疫炎性浸潤(rùn)及脫髓鞘。 6.樹(shù)突狀細(xì)胞在EAE大鼠發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮了主導(dǎo)作用，各期EAE大鼠淋巴結(jié)和脾組織中OX-62陽(yáng)性細(xì)胞持續(xù)表達(dá)；在EAE大鼠脊髓組織中出現(xiàn)的樹(shù)突狀細(xì)胞與局部炎癥反應(yīng)的維持有關(guān)，這也可能是引起復(fù)發(fā)的潛在因素。 7.EAE大鼠發(fā)病后，脊髓室管

10、膜細(xì)胞出現(xiàn)廣泛的增殖反應(yīng)，增殖反應(yīng)的程度與脊髓組織免疫炎性病變的嚴(yán)重程度和部位有密切關(guān)系。 8.中藥對(duì)EAE大鼠發(fā)病過(guò)程的影響 (1)解毒通絡(luò)方和補(bǔ)腎益氣方均沒(méi)有對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞產(chǎn)生明顯的抑制作用。 (2)補(bǔ)腎益氣方對(duì)淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生了較弱的抑制作用，但能抑制淋巴器官內(nèi)淋巴細(xì)胞向外釋放及向脊髓病灶區(qū)浸潤(rùn)；解毒通絡(luò)方雖對(duì)淋巴細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，但同時(shí)也促進(jìn)了淋巴細(xì)胞較早地向外轉(zhuǎn)運(yùn)和向脊髓病灶區(qū)浸潤(rùn)，與其通絡(luò)的作用