解毒通絡方對EAE大鼠中樞神經系統(tǒng)組織基質金屬蛋白酶-9的影響.pdf

1、目的：觀察中藥解毒通絡方對Wistar大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）急性期臨床癥狀、中樞神經系統(tǒng)病理學改變、腦和脊髓組織中基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的影響，探究MS在發(fā)病急性期部分病理機制，為臨床治療多發(fā)性硬化（MS）急性期、挽救神經功能損傷提供新的途徑。
　　方法：
　?。?）準備健康雌性Wistar大鼠80只，按隨機數字表法分為：空白組、模型組、激素組、中藥組，每組20只?？瞻捉M大鼠不造模，不用藥，每天給與生

2、理鹽水0.2ml灌胃；模型組EAE后開始每天給與生理鹽水0.2ml灌胃；激素組EAE后7天開始給予地塞米松藥液灌胃；中藥組EAE后7天開始給中藥液灌胃，以上灌胃方法均灌胃至實驗終止。（2）EAE模型建立：采用豚鼠脊髓勻漿和完全福式佐劑（CFA）制成的混合液作為誘導各組模型大鼠抗原，屆時一并給予皮內注射百日咳疫苗。每日觀察 EAE后各組動物的臨床癥狀表現(xiàn)、行為學改變，測量體重變化情況，并給予神經功能的評分。
　　（3）樣本采集：分別

3、于免疫后第14天和第21天，心臟灌流后取腦和脊髓組織置于4％多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片。
　?。?）蘇木素-伊紅（HE）法染色觀察腦、脊髓病理改變；免疫組化法測定組織內MMP-9含量。
　　(5)統(tǒng)計學處理，采用SPSS19.0軟件包分析處理。
　　結果：
　　（1）大鼠發(fā)病率、神經功能評：在第7d,空白組大鼠均無發(fā)病，模型組、激素組和中藥組間大鼠發(fā)病率及神經功能評分比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。EAE各

4、組大鼠均出現(xiàn)體重輕度下降，相比均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　?。?）EAE后14d大鼠神經功能評分：中藥組與激素組相比無顯著統(tǒng)計學差異（P>0.05），中藥組、激素組分別與模型組相比均明顯降低，統(tǒng)計學差異顯著（P＜0.01），中藥組與激素組比較無顯著統(tǒng)計學差異（P>0.05）；組織病理學切片炎性細胞數相比：中藥組和激素組相比無顯著性統(tǒng)計學差異（P>0.05）；中藥組、激素組分別與模型組相比炎性細胞數均明顯減少，統(tǒng)計學差異明顯

5、（P＜0.01）；MMP-9的表達：中藥組、激素組與模型組相比均有顯著差異（P＜0.01），中藥組與激素組相比無顯著統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　?。?）EAE后21d大鼠神經功能評分：中藥組與激素組相比無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05），中藥組、激素組分別與模型組相比均明顯降低，統(tǒng)計學差異明顯（P＜0.01），組織病理學切片炎性細胞數相比：中藥組和激素組相比無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）；中藥組、激素組分別與模型組相比炎性細胞

6、數均明顯減少，統(tǒng)計學差異明顯（P<0.01）；MMP-9的表達：中藥組、激素組與模型組相比均無顯著統(tǒng)計學差異（P<0.01）,激素組與中藥組比較無顯著統(tǒng)計學差異（p>0.05）
　　結論：
　　（1）采用豚鼠脊髓勻漿添加完全弗氏佐劑并聯(lián)合滅活減毒百日咳桿菌誘導 Wistar大鼠EAE模型穩(wěn)定可靠，發(fā)病率高。
　?。?）在14d急性期時模型組MMP-9表達較空白組明顯升高，激素組、中藥組MMP-9表達較模型組減少顯著，統(tǒng)