補(bǔ)腎通絡(luò)方及其灌胃大鼠血漿中活性成分測(cè)定方法研究.pdf

1、目的：⑴建立同時(shí)測(cè)定補(bǔ)腎通絡(luò)方中馬錢苷、阿魏酸和二苯乙烯苷含量的方法；⑵建立高靈敏度、穩(wěn)定高效的HPLC方法，測(cè)定灌胃補(bǔ)腎通絡(luò)方大鼠血漿中馬錢苷、阿魏酸和二苯乙烯苷的含量；⑶建立AMS方法對(duì)補(bǔ)腎通絡(luò)方中酚酸類成分丹酚酸B進(jìn)行半定量分析，建立HPLC-UV方法對(duì)丹酚酸B進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
　　方法：①采用高效液相色譜法。色譜柱為Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.01％乙酸水溶液(35∶6

2、5，V/V)，檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm(馬錢苷)、320 nm(阿魏酸和二苯乙烯苷)，柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10μL。②以甲醇-乙酸乙酯(3∶1)提取處理血漿，氮?dú)獯蹈珊罅鲃?dòng)相復(fù)溶進(jìn)樣。色譜條件:Johnson spherigel C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇-0.01％乙酸水溶液，梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng):馬錢苷為240 nm，阿魏酸和二苯乙烯苷為320 nm;流速:1 mL/min

3、;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10μL。③采用常壓離子化質(zhì)譜進(jìn)行半定量，高效液相色譜準(zhǔn)確定量。高壓離子源，氦氣流速0.6 L/min，電壓3.5 kV，加熱溫度100℃，全掃描檢測(cè)，負(fù)離子采集模式，進(jìn)樣量為10μL;色譜柱為Johnson spherigel(大連江申)C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.05％磷酸酸水溶液，梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為285 nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量:10μ

4、L。
　　結(jié)果：⑴馬錢苷、阿魏酸和二苯乙烯苷在所建立的色譜條件下峰形良好，質(zhì)量濃度分別在5～250、0.5～25、6～300μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9999、0.9999、0.9998，精密度試驗(yàn)的RSD＜2％，穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于3％，平均加樣回收率分別為93.1％(RSD=1.9％，n=6)、96.3％(RSD=1.9％，n=6)和101％(RSD=1.9％，n=6)。⑵空白血漿中內(nèi)源性物

5、質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定。馬錢苷、阿魏酸和二苯乙烯苷在0.03～3.00、0.03～3.00和0.02～2.00μg/mL范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系(r≥0.999)，檢測(cè)限依次為0.020、0.015和0.010μg/mL，提取回收率分別大于79％、74％和58％，日間、日內(nèi)精密度(RSD)均分別小于10％、7.3％和9.7％，馬錢苷、阿魏酸和二苯乙烯苷在血漿中室溫24 h內(nèi)和反復(fù)凍融3次條件下穩(wěn)定存在。⑶通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，建立了AMS法快速檢測(cè)

6、補(bǔ)腎通絡(luò)方中丹酚酸B，丹酚酸B在2～200μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9961)，重復(fù)進(jìn)樣5次的RSD小于23％，本方法對(duì)樣品的檢測(cè)結(jié)果與HPLC-UV準(zhǔn)確定量方法的檢測(cè)結(jié)果一致，可用于補(bǔ)腎通絡(luò)方中丹酚酸B的快速定性及半定量檢測(cè)。
　　結(jié)論：①本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于補(bǔ)腎通絡(luò)方中馬錢苷、阿魏酸、二苯乙烯苷和丹酚酸B的質(zhì)量控制。②建立的灌胃補(bǔ)腎通絡(luò)方大鼠血漿中馬錢苷、阿魏酸和二苯乙烯苷含量測(cè)定方