山銀花活性成分檢測方法及其質(zhì)量評價研究.pdf

1、山銀花為忍冬屬灰氈毛忍冬、紅腺忍冬、華南忍冬、黃褐毛忍冬的干燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效。收錄在藥典及藥食同源產(chǎn)品目錄中，應(yīng)用廣泛且年消耗量巨大。本文以山銀花及其相關(guān)產(chǎn)品為研究對象，分析了其中的多酚酸、黃酮、皂苷三類物質(zhì)；然后根據(jù)其生長習(xí)性、采收季節(jié)建立了檢測其中潛在風(fēng)險物質(zhì)黃曲霉毒素的分析方法，并對其裂解規(guī)律以及特征碎片離子進(jìn)行分析，為此類物質(zhì)的無目標(biāo)篩查奠定基礎(chǔ)；最后，采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法對山銀花藥材中重金

2、屬及微量元素進(jìn)行分析，對山銀花的質(zhì)量與安全方面進(jìn)行初步探索與研究。主要研究內(nèi)容如下：
　　（1）建立了超聲輔助提取及超高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜法同時定性定量檢測山銀花藥材中三類活性成分的方法。十四種目標(biāo)物的提取參數(shù)利用Box-Behnken design法優(yōu)化，提取參數(shù)如下：62％甲醇為提取溶劑，液固比為106 mL/g，超聲功率為450 W。采用Extend C18(100 mm×2.1 mm，i.d.1.7μm)色譜柱及

3、梯度洗脫。另外，研究了多酚酸及黃酮的裂解規(guī)律并對特征碎片離子進(jìn)行討論，首次提出了多酚酸同分異構(gòu)體之間裂解差異及其機(jī)理。方法驗(yàn)證結(jié)果顯示，各目標(biāo)物在各線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r2>0.9924），日內(nèi)精密度及日間精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在10%以內(nèi)，回收率為84.94%~116.42%。該方法操作簡單、靈敏度高，可用于山銀花樣品的檢測。
　?。?）建立了山銀花藥材中4種真菌毒素的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性定量方法，并對4種黃曲霉毒素的

4、裂解規(guī)律進(jìn)行了分析討論。樣品加60%乙腈提取溶劑后超聲，加0.2 g N-丙基乙二胺凈化以除去山銀花中高含量的多酚酸，提取液吹至近干后復(fù)溶。色譜條件為：Agilent SB C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，i.d.1.7μm）；定量方法采用內(nèi)標(biāo)法，以黃曲霉毒素G2的13C同位素內(nèi)標(biāo)物為內(nèi)標(biāo)。對4個化合物的裂解規(guī)律進(jìn)行分析和總結(jié)，并分析了共同裂解途徑以及特征碎片離子。4種真菌毒素線性關(guān)系良好，r2不低于0.9964，空白樣品的加標(biāo)

5、回收率為78.29%~92.51%。定量限能夠符合檢測要求。該方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于山銀花藥材中黃曲霉毒素的檢測。
　?。?）利用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）檢測山銀花中 Li、Cr、V、Mn、Co、Ni等12種無機(jī)元素。樣品加硝酸和過氧化氫，經(jīng)微波消解后定容，以Ge、In、Sc等六種元素為內(nèi)標(biāo)，過濾后上機(jī)檢測。12種元素在各自線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R>0.999），靈敏度高，可用于分析山銀花中的元素