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文檔簡介
1、目的:通過對(duì)委陵菜樣品進(jìn)行抗菌活性研究并建立其高效液相指紋圖譜,其中黃酮類成分為委陵菜的主要活性成分,并對(duì)委陵菜中5種黃酮類成分進(jìn)行同時(shí)含量測定,旨在為委陵菜的科學(xué)評(píng)價(jià)及其質(zhì)量控制提供依據(jù),并為委陵菜的開發(fā)利用及臨床上的應(yīng)用提供一定的參考價(jià)值。
方法:采用索式提取法提取委陵菜藥材后,并依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到不同部位的萃取物,進(jìn)行抗菌活性測定,用紙片法檢測最低抑菌濃度(MIC)。通過高效液相色譜法(HPL
2、C)建立委陵菜的指紋圖譜,色譜條件如下:色譜柱為:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱,流動(dòng)相為:A乙腈:0.2%磷酸水溶液(5:95),B乙腈:0.2%磷酸水溶液(70:30),梯度洗脫,流速為1 mL·min-1,檢測波長為320 nm,采用指紋圖譜相似度軟件對(duì)不同產(chǎn)地的委陵菜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。通過HPLC法同時(shí)測定委陵菜中5種黃酮類成分的含量。
結(jié)果:委陵菜提取液中的乙酸乙酯層
3、萃取液抑菌效果最佳。該層萃取液對(duì)大腸桿菌的MIC值為0.0625 g·mL-1,對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和枯草桿菌的MIC值為0.125 g·mL-1。在抗菌活性研究的基礎(chǔ)上,建立了10批委陵菜的HPLC指紋圖譜的共有模式,不同批次的委陵菜指紋圖譜均有良好的相似度,共標(biāo)定了11個(gè)共有峰,并通過與標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)確認(rèn)了其中5種化合物,分別為蘆丁、槲皮素、金絲桃苷、山奈酚和芹菜素。蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、芹菜素和山奈酚的濃度分別在12.5
4、0~200、6.25~100、6.25~100、6.25~100、4.00~64.00μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。5種成分的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性的RSD均小于2.0%,平均回收率范圍為97.7%~99.4%,RSD為1.5%~2.9%。
結(jié)論:委陵菜提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌均有良好的抑菌作用。建立的委陵菜HPLC指紋圖譜具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性,符合指紋圖譜的要求,首次
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