山藥多糖提取工藝優(yōu)化及其抗菌活性研究.pdf

1、目的：優(yōu)化山藥多糖提取工藝并對(duì)提取物進(jìn)行分離純化，分析山藥多糖各組份的組成與結(jié)構(gòu)，探討山藥多糖對(duì)五種致病菌的體外抑制作用。
　　方法：采用熱水浸提法和超聲波法提取山藥多糖，在單因素考察的基礎(chǔ)上，以山藥多糖提取率為指標(biāo)，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法篩選最佳提取工藝，確定山藥多糖最佳提取方法。以蛋白脫除率及多糖損失率為指標(biāo)，比較Sevage法和TCA法除蛋白效果，篩選除蛋白的最佳方法。采用H2O2法除色素，透析法除小分子雜質(zhì)，CTAB對(duì)山藥

2、多糖進(jìn)行分離，組份經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析純化。采用高效凝膠滲透色譜法測(cè)定分離得到的兩種多糖的分子量，紅外光譜法測(cè)定其結(jié)構(gòu)，氣相色譜法測(cè)定單糖組成及摩爾比，核磁共振波譜法測(cè)定異頭碳構(gòu)型。通過(guò)紙片法測(cè)定山藥多糖的抑菌效果。
　　結(jié)果：山藥多糖的提取方法為熱水浸提法，最佳提取工藝為提取時(shí)間2.53 h，提取溫度90℃，料液比1:19，山藥多糖提取率為3.37％，含量為38.8%。采用Sevage法除蛋白，重復(fù)四次時(shí)蛋白

3、脫除率為81.7%，多糖損失率為17.2%。經(jīng)CTAB分離、Sephadex G-100純化后得到酸性多糖CYP-1和中性多糖CYP-2，HPGPC檢測(cè)為均一多糖。兩種多糖均為水溶性非淀粉多糖，不含有蛋白質(zhì)及氨基酸，測(cè)定其分子量分別為25171 Da和47786 Da，紅外光譜測(cè)定均具有多糖的特征吸收峰，氣相色譜測(cè)定 CYP-1由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖5種單糖組成，CYP-2由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖4種單糖組

4、成；核磁共振測(cè)定CYP-1及CYP-2均為β構(gòu)型，其中CYP-2還含有α分支結(jié)構(gòu)?？咕鷮?shí)驗(yàn)表明兩種多糖在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌具有較強(qiáng)的抑制效果，對(duì)大腸桿菌的抑制效果較弱，對(duì)腸炎沙門氏菌抑制效果不明顯。
　　結(jié)論：確定山藥多糖的提取方法為熱水浸提法。通過(guò)分離純化得到兩種水溶性非淀粉多糖，具有不同分子量及結(jié)構(gòu)。體外抗菌實(shí)驗(yàn)表明山藥多糖對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、大腸桿菌具有不同程度的抑制作用。