道真山銀花化學(xué)成分分析及粗多糖免疫學(xué)活性的初步研究.pdf

1、目的:對(duì)遵義道真地區(qū)山銀花(Lonicera flos)中的主要成分用不同分析方法進(jìn)行含量測(cè)定,建立道真地區(qū)山銀花的指紋圖譜,可以為道真山銀花化學(xué)成分進(jìn)一步分析提供依據(jù);對(duì)多糖成分進(jìn)行了初步免疫學(xué)活性的初步試驗(yàn),為以后山銀花多糖的免疫活性的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。
　　方法:采用紫外可見分光光度法(UV-VIS)與高效液相色譜法(HPLC)對(duì)道真山銀花中的主要成分進(jìn)行含量測(cè)定,并進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性和方法學(xué)的考察;對(duì)不同批次道真山銀花進(jìn)行高

2、效液相指紋圖譜研究,對(duì)其色譜圖進(jìn)行了相似度的比較;以提取時(shí)間、提取溫度、料液比以及提取次數(shù)4個(gè)因素,設(shè)計(jì)U15(54)均勻?qū)嶒?yàn)對(duì)多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化;用制備的山銀花粗多糖進(jìn)行初步免疫學(xué)活性的試驗(yàn),選擇環(huán)磷酰胺(CTX)誘導(dǎo)的免疫低下的小鼠模型,設(shè)置空白組、模型組以及粗多糖低劑量組(200mg/kg·d)、中劑量組(400mg/kg·d)、高劑量組(800mg/kg·d),取脾臟、胸腺進(jìn)行臟器指數(shù)的考察,測(cè)定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能,

3、測(cè)定半數(shù)溶血值(HC50)、脾淋巴細(xì)胞的增殖指數(shù)。
　　結(jié)果:UV-VIS法測(cè)定山銀花中的總黃酮成分、綠原酸類成分、總皂苷成分的平均含量分別是22.09％、9.45%、29.62%,線性范圍分別是25.85~51.7μg、42.32~105.8μg、150.5~365.5μg;HPLC法測(cè)定山銀花中的蘆丁、綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙的平均含量分別是1.12%、2.48%、7.77%,線性范圍分別是0.1625~4.88μg、2.17

4、5~6.96μg、0.966~7.728μg;建立不同批次道真山銀花高效液相指紋圖譜,比較分析得到13個(gè)特征共有色譜峰,其色譜圖的相似度均在0.95以上;均勻?qū)嶒?yàn)得出的多糖提取最優(yōu)工藝條件是:溫度100℃,料液比1:30,提取3次,每次2h;小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的實(shí)驗(yàn),模型組與空白組比,小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力降低,差異極顯著(P<0.01),山銀花粗多糖高劑量組與模型組比,巨噬細(xì)胞的吞噬能力升高,差異極顯著(P<0.01);臟器

5、指數(shù)的測(cè)定結(jié)果顯示,模型組與空白組比,臟器指數(shù)減小,差異顯著(P<0.05);粗多糖中劑量組與模型組比臟器指數(shù)增加,差異極顯著(P<0.01);半數(shù)溶血值(HC50)的測(cè)定結(jié)果為,模型組與空白組比,HC50降低,差異顯著(P<0.05),粗多糖低劑量、中劑量組與模型組比,HC50升高,差異極顯著(P<0.01);脾臟淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)的測(cè)定結(jié)果顯示,不同濃度的金銀花多糖可促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖,在濃度500μg/ml時(shí)作用最強(qiáng),增殖指數(shù)

6、為1.521。
　　結(jié)論:HPLC法測(cè)定道真山銀花中綠原酸及和灰氈毛忍冬皂苷乙的含量,均符合2010版《中國藥典》的規(guī)定;10個(gè)批次道真山銀花HPLC指紋圖譜的相似度均在0.95以上,有13個(gè)共有峰,按照相關(guān)規(guī)定可建立其指紋圖譜的特征共有色譜峰,能夠?yàn)榈勒娴貐^(qū)山銀花藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù);均勻試驗(yàn)優(yōu)化山銀花粗多糖的提取工藝,最優(yōu)提取工藝穩(wěn)定;通過對(duì)CTX誘導(dǎo)的免疫缺陷小鼠的相關(guān)指標(biāo),包括巨噬細(xì)胞的吞噬功能、臟器指數(shù)、HC50以及脾